Факторы неспецефической защиты - первая лекция: Перикиси, свободные радикалы. ПОЛ, ФНО, БОФ (белки острой фазы), нуклеазы, фибронектины, интерферон, лизоцим, катионные белки, NO, лектиныБольшую роль в формировании антиинфекционной резистентности играет воспаление, образование в очаге молочной кислоты и других ингредиентов с бактерицидными свойствами. 2. Второй механизм индуцируется при парентеральном или пероральном введении в организм чужеродной сыворотки, солевых растворов, высокои низкомолекулярных НК, полисахаридов и др., что приводит к формированию так называемой тахифилаксии , - повышенной неспецифической устойчивости к патогенным агентам разной природы. Ключевым компонентом инфекционной тахифилаксии являются фагоцитарные клетки. /2157к/97/ К неспецифическим факторам общего характера можно отнести - фильтрация низкомолекулярных гидрофильных токсинов через базальную мембрану почек; - деструкция гидрофобных токсинов в системе цитохромов клеток печени (перевод в гидрофильную форму с последующей фильтрацией почками); - быстрый клиренс ряда веществ и фрагментов деструкции паренхимой почек, селезенки, печени; - локальная активация свертывающей системы крови и окружение инфицирующего агента фибриновой оболочкой (против чего ряд микроорганизмов синтезирует фибринолизин); - зона воспаления с отложениями фибрина, препятствующими распространению микробов; - отторжение некротических масс; - деструкция чужеродного материала вместе с окружающей собственной тканью перекисными и радикальными соединениями кислорода (т.е. сама воспалительная реакция) - повышенное отделение слизи или экссудата, рефлексы кашля и чихания; - кислая рН (кожных покровов, секрета влагалища, желудочного сока); - мертвый слой эпителия на поверхности кожи (механическая непроницаемость); - биоценоз толстого кишечника, ротовой полости и др. (микробный антагонизм в отношении случайно попавшей микрофлоры); - диарея; - 'биополе' (сетевое распределение сыпи, микробов или, наоборот, их сосредоточение в локальной области 6 прорыв и выведение с некротическими массами в области локального воспаления) [К факторам неспецифической защиты относят - неспецифические протеазы (катепсины) лизосомальных ферментов; - эритрин - вещество, выделенное из эритроцитов с противодифтерийными свойствами; - лейкины - вещества, освобождаюзиеся при разрушении лейкоцитов; - плакины - вещества, выделяемые тромбоцитами; - абластин - фактор, действующий на возбудитель сибирской язвы; - катионные белки, белки острой фазы (БОФ); - интерфероны и ингибиторы вирусов] - бактериофаги /?/ Естественным механизмам защиты присущи элементы специфичности. Так, - К-клетки действуют с помощью специфических антител. /2157к/97/ - АТ-зависимый фагоцитоз и др. /2157к/97/ Естественная резистентность свойственна всем видам животных, обуславливает устойчивость к химическим, физическим и биологическим агентам. По сути она не относится к иммунологическим реакциям. /2157к/97/ . - 2 - ЕСТЕСТВЕННАЯ ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ Эффекторные клетки - ЕКК, макрофаги, полиморфоядерные лейкоциты. ЕКК (естественные клетки-киллеры) = NK-натуральные киллеры = NKK-натуральне клетки киллеры - это нулевая субпопуляция лимфоцитов (0-лимфоциты) со следующими маркерами. ЕКК представляют собой популяцию больших гранулярных лимфоцитов с цитолитической активностью. Осуществляют первую линию защиты, уничтожая опухолевые клетки или зараженные вирусами собственные клетки. _Фенотип ЕКК . (маркерами ЕКК являются:) - CD16 - слабоаффинный Fc-рецептор для Ig G и/или - NCAM (гомолог CD56), и/или - CD57, который также известен как HNK1. /2289к/96/ Данные молекулы экспрессируются не только на ЕК-клетках, но и на других субпопуляциях лимфоцитов. - CD69 экспрессируется на ЕКК и лимфокин-активированных клетках-киллерах после их стимуляции форболовыми эфирами (форболмиристат ацетатом - ФМА), ИЛ-2, альфа-ИФ или антителами к CD16. /2289к/96/ - На ЕКК постоянно экспрессируются молекулы адгезии VLA 1,2,4,5,6. После длительной стимуляции ИЛ-2 экспрессия VLA-6 снижается. В отличие от Ти В-лимфоцитов у ЕКК отсутствует экспрессия CD3-антигена, Т-клеточного рецептора и иммуноглобулинов. _Субпопуляции ЕКК .: - c функцией цитолиза - СD16+/leu19+/CD3- - с цитотоксическими функциями - СD8+/Leu7+. /7388/92/ Клетки-мишени (КМ): - опухолевые, - вирус-пораженные клетки (ВПК), - бактерио-пораженные клетки /?/. - трансплантированные клетки красного костного мозга. Процесс узнавания (рецепторные структуры): _ЕКК лизируют клетки, лишенные HLA I . . - За негативное распознавание С -аллелей ГКГ (главного комплекса гистосовместимости) отвечает белок _р55-58 .. /2289к/96/ - NKB1 ( _gp-70 . - гликопротеин 70кД) может быть определен как негативный рецептор для аллелей В 51, 5801, 2702 ГКГ. /2289к/96/ Различные ЕК-клоны способны специфично лизировать определенные аллогенные мишени, и на основании этого постулировал существование репертуара различных ЕК-клеток (уникальная способность лизировать определенные аллогенные клетки). /2289к/96/ Для объяснения роли ГКГ 1 класса в процессе узнавания клеток-мишеней ЕК-клетками, были предложены 2 теории. 1) Гипотеза 'эффекторного ингибирования' постулирует, что _HLA I . в процессе узнавания функционирует _как негативный сигнал . для ЕК-клеток. Поэтому клетки с низким уровнем экспрессии HLA I (ГКГ 1) класса служат лучшими мишенями для ЕК-клеток. 2) Теория 'влияния мишени' предполагает, что молекулы ГКГ 1 класса или пептиды могут маскировать структуры, узнаваемые ЕК-клетками, по типу конформационного ингибирования. /2289к/96/ - ГКГ В-специфические рецепторы обеспечивают негативную сигнализацию (CD94 или Кр43); они представляют гомодимерные молекулы и принадлежат ко второму типу лектиноподобных трансмембранных протеинов. АТ к CD94-рецептору ЕКК способны нейтрализовать защиту аллелей В7, В8 и В14 ГКГ (клетки начинают лизироваться ЕКК при стимуляции их ИЛ-2). /2289к/96/ - CD44 (рецептор для гиалуроната) может усиливать спонтанную и CD6-опосредованную АТ-ЗКЦ. /2289к/96/ - _Молекулы адгезии и протеины теплового шока . также могут выполнять роль позитивных рецепторов дл ЕКК-клеток. ИЛ-2-стимулированные ЕК-клетки способны распознавать реорганизацию ICAM-2-молекул на поверхности клеток-мишеней. /2289к/96/ -- Лигирование (=связывание) бета-1-интегринов антителами или фибронектином может активировать ЕКК и усиливать их АТ-ЗКЦ. Данные функции хорошо коррелируют с экспрессией на ЕК-клетках _рецепторов для внеклеточного матрикса .. /2289к/96/ _ Механизм киллинга _ЕКК . (не один фактор) : Запуск апоптоза в опухолевых клетках. Предположителен выброс ионов кальция из кальмодулина и нарушение метаболизма. Са2+, ФНО-?, цитолизины /?/. Радикалы механизм киллинга не опосредуют. Повреждение клеточных мембран с помощью протеолитических ферментов азурофильных гранул. /2331к/97/ ( - ) - ЕКК ВПК 9 0 - ЕКК _Макрофаги .: ПОЛ (МПХ), лектин-зависимая цитотоксичность опухолевых клеток и микробов, ФНО, интрерферон. - 3 - _Нейтрофилы . (противоопухолевая активность и против ВПК): ? (стимулируется активаторами). Механизм не обусловлен метаболитами АК: радикалами кислорода, продуктами дегрануляции клеток. /2319к,2320к/ _Эозинофилы .: перфорины _ Регуляция - У детей появляется на 10-й неделе беременности; у новорожденных активность ЕКК достоверно ниже, чем у взрослых и прогрессивно возрастает вплоть до зрелого возраста. С тимуляторы естественной цитотоксичности - бактериальные экстракты (стимулируют выработку ФНО, на 40% повышают активность ЕКК). /6145/ - ИЛ-2, лектины (пролиферация запускается лектинами и ИЛ-2). /6145/ -- У больных, получавших иммунодепрессанты (при пересадке почек) частота опухолеобразования увеличивается в 350 раз. -- У детей с врожденным иммунодефицитом частота злокачественных опухолей возрастает в тысячу раз. (Л 96 ) (Нет ИЛ-2) - Гистамин /6145/ - Антитела к CD69 индуцируют пролиферацию и цитолитическую активность и, по-видимому, действуют через активацию тирозинфосфорилазы. /2289к/96/ Ингибиторы - ИЛ-3 и др. . - 4 - НЕЙТРАЛИЗАЦИЯ ЧУЖЕРОДНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЛИ КЛЕТОК РАЗЛИЧНЫМИ БИОХИМИЧЕСКИМИ КОМПОНЕНТАМИ I. ПЕРЕКИСИ И РАДИКАЛЫ (ПЕРЕКИСНОЕ И СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОЕ ОКИСЛЕНИЕ липидов, белков, нуклеиновых кислот) Поскольку основным субстратом выступают полиненасыщенные жирнокислотные остатки мембранных липидов, эти реакции принято называть ПОЛ. /2372к-х/ Кислород используется в процессах окислительного фосфорилирования (примерно 90%) и на образование активированных кислородных метаболитов (АКМ) - 0 2 - , Н 2 0 2 , ОН . , НОСl, RО 2 . , NО . . /7041/93/ Окисление: - присоединение кислорода Источник - дыхание - отнятие водорода - НАД.Н, НАДФ.Н - отнятие электрона - ионы железа Механизм: Cu 2+ >рН 1. МПХ, Сl - ,иодирование Fe 2+ 6 Fe 3+ 6 ОСl - + МДА е - Н + Н + 2. О 2 6 0 2 - 6 Н0 2 - 6 Н 2 0 2 6 ОН . + НООR 6 ОR . СОД % 3. 6 Н 2 0 (супероксиддисмутаза) каталаза,пероксидаза-ПХ ГПХ: 2Г-SH + Н 2 0 2 6 ГSSГ + Н 2 0 недооксиленные продукты - ? Рис. Схема перекисного и радикального окисления органического субстрата /R/ (липидов, белков, нуклеиновых кислот) 1 и 3 пути метаболизма перекиси водорода - ферментативные, 2 путь - неферментативный с образованием перекисей липидов, при котором антимикробная активность перекиси водорода может усиливаться под действием аскорбиновой кислоты, йодидов, кислой реакции среды. О 2 - супероксид О 2 - - супероксиданион Н0 2 - - протонированная форма НО . - гидроксильный радикал О 2 . - синглетный кислород (с параллельными спинами 2 электронов) Результат ПОЛ: - рН повышается, - окисление органического субстрата; перевод липидов в растворимую форму.] СОДаза предотвращает поражение тканей реактивными оксипроизводными в условиях кратковременной нехватки кислорода, особенно в ходе хирургических операций, когда нужно внезапно восстановить ток крови. /1998г./ Аскорбиновая кислота (аскорбат) взаимодействует с ионами меди, железа, перекисью водорода. Способствует ПОЛ, оказывает бактерицидное действие. При недостаточности МПХ больные восприимчивы - к кандидам и - стафилококковой инфекции (лечение антибиотиками). /7685/82/ - клебсиеллам - кишечной палочке, - серрациям, - сальмонеллам - микобактериям, - аспергиллам - псевдомонас и др., имеющим каталазу. /2225к/ ПОЛ сопровождается весьма слабой хемилюминесценцией. Хемилюминесценция подавляется цианидом, ЭДТА (связывают Fe 2+ ), усиливается при добавлении ионов Fe 2+ в суспензию микросомальной фракции. /2804к/ Признак повышенного ПОЛ - блеск кожи /?/ (Руки светятся /блестят/ после стирки.) _Сущность свободнорадикальных реакций Согласно теории свободнорадикального (перекисного) окисления, сформулированной А.Н.Бахом, окисление органической молекулы кислородом протекает по принципу цепного механизма. Инициаторами окисления всегда выступают свободные радикалы - частицы - 5 - имеющие неспаренный электрон (Х . ). Свободные радикалы образуются под действием различных факторов, объединяемых понятием - _ прооксиданты. . К прооксидантным факторам относятся действие света, ультрафиолетового излучения, ионизирующей радиации. Прооксидантами являются соединения, самопроизвольно распадающиеся с образованием свободных радикалов, например диазосоединения. Свободные радикалы также образуются в присутствии ионов переменной валентности в результате одноэлектронных окислительно-восстановительных реакций: Fe 2+ + X 6 Fe 3+ + X . В условиях живого организма важная роль в инициировании свободнорадикальных реакций принадлежит продуктам неполного восстановления молекулы кислорода: _ _ _ _ e - e e e O 2 6 O 2 . 6 H 2 O 2 6 HO . 6 H 2 O +2H + -H 2 O +H + суперокись перекись гидроксильный кислорода водорода радикал Образовавшиеся свободные радикалы вступают во взаимодействие с молекулой окисляющегося органического вещества с образованием радикала этого вещества ( реакция инициирования цепи ): X . + RH 6 XH + R . Радикал R . может реагировать с кислородом, образуя перекисный радикал: R . + O 2 6 RO 2 . Перекисный радикал, в свою очередь, реагирует с новыми молекулами окисляемого вещества, обусловливая цепной характер процесса, и превращается в гидроперекись ( реакция продолжения цепи ): RO 2 . + RH 6 ROOH + R . Чередование двух последних реакций лежит в основе цепного характера окисления: O 2 RH O 2 RH O 2 ^ ^ ^ ^ ^ R . 6 RO 2 . 6 R . 6 RO 2 . 6 R . 6 RO 2 . и т.д. ^ ^ ROOH ROOH В присутствии металлов переменной валентности гидроперекиси распадаются с образованием новых радикалов: ROOH + Fe 2+ 6 RO . + OH - + Fe 3+ Образовавшиеся новые радикалы инициируют появление новых цепей окисления ( реакция разветвления цепей ) и процесс окисления приобретает самоускоряющийся, 'взрывной' характер. Если бы свободные радикалы всегда реагировали только с новыми молекулами органического вещества, то один-единственный радикал рано или поздно превратил бы в перекиси все молекулы вещества. Однако в действительности этого не происходит и процесс окисления рано или поздно останавливается. Этому способствуют так называемые реакции обрыва цепи , в ходе которых радикалы реагируют друг с другом, с ионами переменной валентности или с антиоксидантами с образованием кинетически инертных молекул: а) R . + RO 2 . 6 RO 2 R (молекулярный продукт) б) RO 2 . + Fe 2+ + H + 6 ROOH (молекулярный продукт)+ Fe 3+ в) RO 2 . + InH 6 ROOH + In . (малоактивный радикал) Реакция взаимодействия радикалов друг с другом называемая также реакцией диспропорционирования радикалов, сопровождается хемилюминесценцией - испусканием квантов света. Поэтому регистрация хемилюминесценции широко используется как метод исследования реакций свободнорадикального окисления (Ю.А.Владимиров, А.И.Арчаков, 1972). Между моментами появления и исчезновения свободного радикала происходит несколько последовательных циклов реакций с участием радикалов R . и RO 2 . , в результате чего на каждый появившийся в системе радикал образуется несколько молекул гидроперекисей. Это число характеризует длину цепи . Длина цепи ограничивается реакцией обрыва и сокращается в присутствии антиоксидантов, чем и объясняется их действие в качестве ингибиторов свободнорадикальных процессов. В условиях клетки интенсивность реакций свободнорадикального окисления во многом зависит от наличия свободных ионов Fe 2+ , поскольку в окисленном или связанном состоянии железо неактивно. Восстановление ионов Fe 3+ в Fe 2+ называется регенерацией Fe 2+ . Перекисное окисление обязательно в определенной степени происходит в норме, выполняя следующие функции. _ Функции физиологические: 1. обеспечивают деструкцию чужеродного материала в фаголизосомах; недостаток ПОЛ приводит к хроническому гранулематозу; - обеспечивает 50% гибель простейших и грибов /кандид/ (хлорированными и иодированными формами); 2. инактивация ксенобиотиков (в цитохромах Р-450 и других цитохромах эпс печени, в митохондриях печени и других клеток); 3. обеспечивает разборку мембранных структур в процессе регенерации (ионы переменной валентности (титан, железо, медь, цинк) ускоряют заживление ран /1699к/83/), - 6 - 4. регуляция вязкости мембраны (через метаболизм арахидоновой кислоты=АК); - участвуют в метаболизме арахидоновой кислоты; 5. роль в онтогенезе и клеточной пролиферации; - регуляция функций лимфоцитов; - регуляция тонуса сосудов. Почти при каждой патологии наблюдается интенсификация ПО. Хотя есть и такие состояния, которые характеризуются снижением уровня ПО, например, в межприступный период астмы. _ Функции патологические .: 1. ПОЛ опосредует механизм деструкции (-- ксенобиотиками,) -- при ишемии и реперфузии, -- в очаге воспаления (поражение тканей, органов, клеток, молекул). Дисбаланс в системе 'АКМ (=активированные кислородные метаболиты)-антиоксиданты' получил название 'окислительного стресса'. /2220к/97/ 2. ПОЛ участвует в атерогенезе, старении. /7041/93 и др./ 3. Мутагенный, онкогенный эффект. 4. Повышение проницаемости мембран клеток для ионов может привести клетку к функционально неактивному состоянию. 5. Белки, поврежденные радикалами, запускают ИО. /7957/91ин./ Наиболее вероятными источниками активированных кислородных метаболитов при ишемии являются ПМЛ, ксантиноксидазная система, митохондриальное дыхание, катаболизм АТФ, процессы деградации АК, аутоокисление катехоламинов, реакции, иницированные ионами металлов переменной валентности. /2220к/97/ Свободнорадикальная патология: авитаминоз E,K, беломышечная болезнь. /7041/93/ ПО повышается при ПО снижается при - гипероксии (статус эпилепти- - раке, кус, легочная дисплазия ...) - хроническом гранулематозе - гипоксии, реоксигеназный (недостаточности МПХ) парадокс (восприятие нормаль- - в межприступный период ного уровня кислорода как бронхиальной астмы избыточного) - трисомии 21 (ген СОД в 21 - интенсивной мышечной деятельхромосомы, поэтому его ности синтезируется на 50% боль- - старении, ше нормы (синдром Дауна - - воспалительных процессах дети гибнут от инфекции (острых и хронических) из-за недостаточности ПО) - воздействии радиации - избытке витамина Е - курении - химических отравлениях (ССl 4 ,паракватом,различными канцерогенами - бензпиреном и др. -- лекарственной гемолитической анемии (фенилгидразиновой..) - дефиците витаминов Е и А - при наркоманиях (морфин, 10 -6 М) /2319к/ - симптом каменного сердца (не отвечает на раздражители) Под действием оксидантов в В-клетках повышается фосфорилирование по тирозину (тирозиновая протеинкиназа). /2228к/ Гипоксия и ишемия являются универсальными патологическими процессами, нарушающими метаболизм и функции клетки при большинстве критических состояний. Независимо от причин гипоксии и ишемии, в основе нарушений лежат дефицит энергопродукции и активация процессов ПОЛ. Возникает своеобразный порочный круг: недостаток кислорода нарушает энергетический обмен и стимулирует свободнорадиальные процессы в клетке, а активация свободнорадикального окисления ведет к повреждению мембран митохондрий и углубляет энергетический дефицит. /7956/96/ Регуляторы ПОЛ /7041/93/ ОКСИДАНТЫ АНТИОКСИДАНТЫ ИНДУКТОРЫ Ионы 2-валентного железа I. ГИДРОФОБНЫЕ медь - токоферол (витамин Е) МПХ - каротин, витамин А кислород (гипероксия) - насыщенные ЖК озон - ЛПВП (2368к) диоксид азота - холестерин - 7 - эндопероксиды II. ГИДРОФИЛЬНЫЕ ФАТ, ИЛ-1, ФНО 6 АК 1. Ферментативные ионизирующая радиация - каталаза, ПХ,СОД УФ облучение - селен-содержащие ГПХ, загрязнители воздуха глутатионтрансферазы (ксенобиотики) 2. SH-содержащие соединения свободные радикалы табач- (тиоловые соединения) ного дыма - цистеин, цистин, метионин некоторые химические ве- - тиолы, восстановленный щества пищевого глутатион рациона - трипептид (цис-глу-гли)=GSH 3. Соединения, содержащие енольные группы Стимуляторы ПОЛ: - аскорбиновая кислота - ? - цисполиеновые ЖК - фенольные антиоксиданты - детергенты и сурфактанты 4. Хелатные соединения - лектины (связывающие металлы - АТ (ИК) переменной валентности) - компоненты комплемента - ферритин, (опсонины) - трансферрин, - хемотаксические факторы - лактоферрин, - опсонины - церулоплазмин, - форболмиристатацетат /7531/ 5. Другие - _этанол - гепарин - молочная, лимонная кислоты-? - мочевая кислота, - некоторые пептиды - селен Антигипоксанты - гутимин, - амтизол - триметазидин /7956/96/ Актопротекторы (усиливают синтез белков, в т.ч. и антиоксидантов /7956/96/ - бемитил - этомерзол Гистидин (является 'уборщиком' гидроксильного радикала /2319к/ Ниацин /?/ Глютатион-S-трансфераза трансферрин, ферритин церулоплазмин гемопексин гаптоглобин При дефиците токоферола (витамина Е) развиваются тяжелые поражения тканей (некротические очаги в печени, мышечная дистрофия, гемолиз эритроцитов в крови, поражение нервной ткани, стерильность гонад). И наоборот, повышение концентрации антиоксидантов может вызвать рецидив инфекционного воспаления (подавление деструкции фагоцитируемого материала 6 незавершенный фагоцитоз). _Селен .. Биологическая роль селена обусловлена его включением в состав антиоксидантных ферментов: ГПХ, фосфолипидгидропероксидглютатионпероксидазы и фосфолипидгидропероксид ГПХ. Селен входит также в состав 5'-иодотирониндеиодиназы. Уровень селена снижается при ревматоидном артрите. /2240к/95/ МЕХАНИЗМ 1. Ферментативное - включается в нормальный метаболический процесс (в участием НАДФхН 2. Неферментативное - использует в качестве восстановителя железо и аскорбиновую кислоту. . - 8 - II. НУКЛЕАЗЫ (ФИА - ФАКТОРЫ, ИНДУЦИРУЮЩИЕ АПОПТОЗ) Нейтрофилы секретируют факторы, индуцирующие апоптоз разных клеток-мишеней ( _ апоцитоз . окружающих клеток). В свои вакуоли нейтрофилы выделяют фактор, индуцирующие апоптоз (ФИА) клеток, которые разрушают геном микробов. Это ферменты с высокой нуклеазной активностью ( _нуклеазы .). При массивном проникновении в организм инфекционных агентов нейтрофилы активно поглощают микробы и, не заботясь об их истинном переваривании, выбрасывают в межклеточное пространство значительные количества ФИА. Цель реакции - произвести в сжатые сроки как можно более выраженное _повреждение генетического аппарата микробов .. ФИА губительны для всех клеток: они способны осуществить деградацию НК генома любых биосистем - эукариот, прокариот, вирусов. Нейтрофильные ФИА индуцируют ускорение апоптоза и у самих нейтрофилов. /2226к/97/ Фагоцитоз и апоцитоз - разные, но функционально сопряженные процессы. Нейтрофилы с помощью ФИА инициируют воспалительную реакцию. Процесс воспаления - это реакция организма на ФИА. /2226к/97/ Нейтрофилы - это клетки, у которых включена генетически заданная программа клеточной гибели. На поверхности нейтрофилов по прошествии некоторого времени появляются структуры, которые обусловлены апоптозом и которые узнаются макрофагами (САН - структуры апоптоза нейтрофилов). Фагоцитоз 'старых' нейтрофилов осуществляется макрофагами. /2226к/97/ III. ФАКТОР НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ (ФНО=TNF) (6490,6493,6501/89;9-53-530-91) В конце ХIХ века американский ученый Уильям Коле заметил, что инфекционный процесс у больных опухолями ведет к регрессии и даже исчезновению опухолей. Это наблюдение использовали затем для лечения опухолей путем преднамеренного заражения слабопатогенными микроорганизмами (стафилококком, ослабленным штаммом энтеровирусов и др.) Лечебным эффектом обладала также сыворотка инфекционых больных. /1318/90/ В 1851г. Latour лечил опухолевые заболевания введением живых трепонем, а Busch - инъекциями возбудителя рожи. В начале ХХ века Adam и Much начали применять в лечении опухолевых и инфекционных заболеваний лизаты, белки и липиды ряда бактерий. /2341к/94/ Это дало повод к поиску антитуморогенного фактора. ФНО был обнаружен в 1975г. Карсвеллом. Альфа-ФНО - синтезируется многими клетками (в т.ч. макрофагами = кахектин) бета/?/ -ФНО - продукт только Т-лимфоцитов (= лимфотоксин - альфа и бета). /1666к/94,2283к/96, 2460к/95// (Белки гомологичны на 30-50% по первичной структуре /7471/.) _Биохимия М. кахектина 17кД /6496/90,7471/; три идентичные субъединицы /6498/. Предполагается, что металлопротеин. /2376к/ (Синтезируется как прогормон, встраивается в мембрану, затем выделяется.) Альфа и бета-ФНО имеют общий рецептор. /1666к/94/ Количество рецепторов к альфа-ФНО на 1 нейтрофиле составляет 2-6 тысяч при 4 о С и около 600 при 37 о С (деградирует-?). /2273к/ Механизм активации ФНО протеинкиназы С: ФНО 6 рецептор для ФНО 6 активация фосфолипазы С 6 гидролиз ФХ 6 фосфорилхолин и ДАГ (увеличение уровня 1,2-диацилглицеролаз /ДАГ/ (через 15с.) 6 активация протеинкиназы С. /2366к/91/ _Синтез В норме ФНО обнаружен только в фагоцитах (макрофагах и нейтрофилах) . ФНО синтезируется у больных артритом мононуклеарными клетками синовиальной жидкости /6494/; в ткани легких больных туберкулезом (при туберкулезе и фиброзе в клетках эндотелия); астроцитами под действием ЛПС /6493,7637/91/, ЭК (под действием ЛПС лейкоциты прилипают к поверхности ЭК и проникают через эндотелий; ФНО локализуется на поверхности мембраны). /7585/92/ Стимуляторы синтеза - эндотоксины (ЛПС и др.-?). ИЛ-1-? Гены в районе НLА III класса (6 хромосома). _ Биохимические свойства и выполняемые функции Социальный уровень При введении животным ФНО развивается картина, характерная для септического шока (повышается температура /опосредованно через ИЛ-1-?/, развивается тахикардия, повышается уровень адреналина, снижается количество лейкоцитов).(ЖМЭИ-94-N3; 6488/87/ ФНО увеличивает сосудистую проницаемость за счет образования щелей между ЭК. (ЖМЭИ-94-N3-С.119) При развитии толерантности к ФНО развивается толерантность и к эндотоксину. /6488/ Иммунизация ФНО животных приводит к снижению летальности; Летальный исход удается затормозить АТ-ми к ФНО. (ЖМЭИ-94-N3-119) - _Вызывает лихорадку . /1666к/94/, наиболее ранний цитокин, выделяющийся при индикации сепсиса. /2359к/ _Введение здоровым лицам . ФНО приводит к повышению на 30% энергозатрат организма (через ЦО-ую систему); механизм блокиру- - 9 - ется ибупрофеном. Развивается гипогликемия через 2 часа после введения, липолиз (мобилизация ЖК из жировой ткани 6 печень 6 синтез /?/), повышается протеолиз в мышечной ткани, усиливается синтез белка в печени. /2359к/93/ _Системное введение a -ФНО . животным (0,6 мг/кг) приводит к целому ряду пуатологических состояний /7638/: - ацидозу, - диарее /7638/92/, - нейтропении , - отеку легких /2292к/, - гипотонии (падению АД), - шоку (ФНО и эндотоксин синергически активируют систему комплемента, вызывают шок и повреждение толстого кишечника; дефицит С5 предотвращает шок /6168/91/). У человека длительная выработка ФНО может привести к - учащению дыхания (тахипноэ) [через активацию метаболизма арахидоновой кислоты и повышенный синтез лейкотриенов /6497/], - истощению белков и липидов, - анемии, - _кахексии . при персистирующей продукции /6501/, - к летальному исходу, поэтому ФНО называют 'летальным фактором'. Организменный уровень _Уровень альфа-ФНО повышается при - инфаркте миокарда, - вирусном гепатите, - роже, - инфекционном мононуклеозе, - иерсиниозе, - менингите (опосредует эндотоксический шок), - сепсисе, - трихинеллезе. /7955/92/ - при коллагенозах, - у больных с грибовидным микозом, - при миеломной болезни /2376к/, - уровень ИФ коррелирует с тяжестью СПИДа. - при псориазе (реакция на суперантиген кожи) /2376к/ ФНО-альфа является ключевым цитокином при псориазе. Считают, что псориатические поражения начинают образовываться под влиянием ИЛ-1 и альфа-ФНО, синтезируемых кератиноцитами, активированными под влиянием внешних факторов. /1666к/94/ _Уровень ФНО снижается - при тяжелом атопическом синдроме. /2376к/ _Свойства 1) Стимуляция иммунитета хозяина (организма). /7827/93/ 2) Снижение кровяного давления. /2292к/ 3) Шок. /2292к/ Системный уровень 1) Пирогенность (прямое действие на гипоталамус). /2292к/ 2) Усиливает ангиогенез. /1666к/ 3) Стимулирует лейкопоэз (нейтрофилов). /2292к/ Тканевой/органный уровень 1. Цитотоксическое/цитостатическое действие на _опухоль . . Механизмы: - ФНО-альфа вызывает фрагментацию ядерной ДНК опухолевых клеток, а ИЛ-1 убивает опухолевые клетки с рецепторами к нему. /2348к/95/ (ИЛ-1 способен самостоятельно убивать меланому А 375. Возможно, через ИЛ-1 осуществляется естественная цитотоксичность моноцитов. /5694/87/) Сходство с ИЛ-1 (по-видимому, из-за сходства индуцирующихся ими цитокинов) /7472/: - цитоцидный эффект на клетки некоторых опухолей; - индуцируют повышение температуры тела; - стимулируют продукцию хемотаксического фактора (NAP-1) для нейтрофилов моноцитами и фибробластами человека; - вызывают воспаление, фиброплазию, ангиогенез; - сходно воздействуют на эндотелиальные клетки /ЖМЭИ-94-N3-С.110-114/ - индуцируют экспрессию рецепторов к ИЛ-2, образование ИЛ-6, колониестимулирующих факторов, БОФ; - радиопротекторные свойства - Через ИФ. Ряд опухолевых клеточных линий чувствительны к действию одного ФНО, другие - к совместному действию с гамма-интерфероном (лимфоцитов). Часто усиление злокачественности опухолевых клеток коррелирует с увеличением чувствительности к ФНО. Нетрансформированные клетки не чувствительны даже к комплексу с ИФ. /6490/ ФНО - индуктор дифференцировки клеток-опухолей. /6499/ - Через тромбопластин ЭК. Альфа-ФНО повышает экспрессию тканевого фактора, что повышает коагуляционный потенциал в местах воздействия. В ткани фибросаркомы (мышей) ФНО приводит к свертыванию крови (выбросу - 10 - тромбопластина) и тем самым к противоопухолевому эффекту. /0041/ Деструкция сосудистой цепи опухолей. /7827/93/ Прокоагулянтная активность блокировалась моноклональными антителами к тканевому фактору. /0041/ - Через ЕКК. Усиливает активность ЕКК. /2157к/ 2) Стимуляция синтеза БОФ (активация гепатоцитов). /2292к/ В то же время ИЛ-1 и ФНО-альфа подавляют синтез некоторых БОФ (фибриногена, гаптоглобина), индуцируемых ИЛ-6. /2294к/95/ Клеточный уровень 1. ВПК (вирус-пораженные клетки). Принимает участие в уничтожении клеток, зараженных вирусами везикулярного стоматита и простого герпеса, по-видимому, индуцируя продукцию ИЛ-6. 2. Подавляет размножение трипаносом, малярийного плазмодия. 3. _Лейкоциты .. - Активирует лейкоциты (макрофаги, лимфоциты). Усиливает продукцию макрофагами ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ФАТ, лейкотриенов /ЛТ/, ТХ А2, простагландинов /Pg/. Аутокринная секреция. /2292к/ - Оказывает иммуностимулирующее действие на Ти В-лимфоциты, ЕКК. Стимулирует синтез АТ в культуре клеток. /2283к/ Стимуляция ГЗТ (образование гранулем). /2292к/ - Стимуляция фагоцитирующих клеток. /2283к/ Повышает естественную резистентность за счет активации макрофагов и гранулоцитов , повышения кислородного метаболизма фагоцитов. /7073/ - Стимулирует фагоцитоз, активирует АТ-ЗКЦ нейтрофилов. /2273к/ - Влияет на активность нейтрофилов (хемотаксис, адгезию к ЭК, секрецию перекиси водорода; освобождение лактоферрина), эозинофилов, Ти В-лимфоцитов, ЭК. /6499/ - Индукция экспрессии различных молекул адгезии, Fc-рецепторов, АКТГ, онкогенов /6496/; стимуляция продукции цитокинов (ИЛ-1,6, ксф), . /6496,7173/ 4. _ЭК. - Повышение адгезивности ЭК (усиление экспрессии адгезивных молекул), нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, моноцитов и (в меньшей степени) лимфоцитов. /2292к/95/ - Стимуляция экспрессии тромбопластина ЭК-ми. /2292к/95/ - Повышение проницаемости сосудов (прямая токсичность для эндотелиальных клеток). /2292к/95/ - Повышает экспрессию АГ-ов ГКГС классов I и II на ЭК и фибробластах. /1666к/ 4. Индуцирует синтез ИЛ-1,6,8, ВПМ-1, ТФР-альфа в культивированных _кератиноцитах .. /1666к/ Активный синтез ФНО-альфа в коже связывают с процессами реэпителизации. /2376к/ 5. Стимулятор синтеза коллагеназы _синовиальными клетками /6490/86/, _фибробластами . /6494/89/. 6 резорбция костной и хрящевой ткани. Стимуляция роста фибробластов. /6490/ Способствуют обновлению костной и хрящевой ткани. ФНО-альфа стимулирует ангиогенез и увеличивает митогенез и инвазивную миграцию фибробластов (физиологическая роль ФНО в регуляции процесса заживления ран). /2376к/ Повышает экспрессию АГ-ов ГКГС классов I и II на фибробластах. /1666к,7638/92/ 6. _Жировые клетки . (подавление активности липопротеинлипазы и метаболизма жировых клеток). /2292к/ 7. Клетки _мышц . (снижает мембранный потенциал, ослабляет сократительную активность кардиомиоцитов; истощение энергетичекого потенциала мышечных клеток). /2292к/ 8. ФНО-альфа регулирует пролиферацию и дифференцировку гемопоэтических предшественников. /2376к/ Субклеточный уровень 1. Активатор ПОЛ , что приводит к повреждению тканей и развитию воспалительной реакции. ФНО - медиатор в патогенезе инфекционного воспаления. Например, при септицемии наблюдается сверхпродукция ФНО с последующим поражением сердца, сосудов и других органов, развитие септического шока. Уровень ФНО значительно повышен при септицемии, а также у больных СПИДом./7073/ 6 Бактерицидный эффект ФНО (и КСФ) усиливает продукцию супероксидных радикалов (О 2- ) и хемотаксис нейтрофилов /2360к/94/ особенно в ответ на С5а и FMLP (f-met-leu-phe). Однако цитокин не усиливал генерацию радикалов при стимуляции нейтрофилов форбол миристат ацетах том. /2364к/92/ 2. Альфа-ФНО, лимфотоксины альфа и бета используют один рецептор. Функциональная неполноценность или недостаток рецепторов к ФНО вызывает выраженный иммунодефицит (ИД). Мыши при этом приобретают высочайшую чувствительность к инфекции Listeria monocytogenes. /2460к/ Вместе с тем приобретается резистентность к летальному действию ЛПС (липополисахарида Гбактерий). Делеция гена рецептора приводит к полному отсутствию ЛУ в организме дефектного животного, резистентности к летальному эффекту ФНО-альфа, отсутствие кожной реакции на интрадермальное введение - 11 - ФНО-альфа. /2460к/ 2. Противовирусная активность. /2283к/ Биохимический уровень 1. Активатор метаболизма арахидоновой кислоты с образованием простагландинов (Pg E 2 6 иммунодефицит) и лейкотриенов. - Стимулирует синтез Pg E2 клетками передней доли гипофиза. /7774/88/ 2. - повышает экспрессию АГ-ов ГКГС классов I и II на ЭК и фибробластах, - индуцирует синтез ИЛ-1,6,8, ВПМ-1, ТФР-альфа в культивированных кератиноцитах. /1666к/ 3. Активирует NO-синтетазу, вызывающей образование NO-реактивных метаболитов. ИЛ-10 ингибирует NO-синтетазу. /2294к/95/ Физический уровень Обладает радиопротективными свойствами. /7472/ _ Регуляция [Система ФНО включает - 2 лиганда (альфаи бета), - два рецептора (к альфа и к бета), - два ингибитора - ФНО-связывающие протеины I и II./7470/91/ Рецептор к ФНО входит в семейство рецепторов фактора роста нервов, антигенов лимфоцитов (ОК-40-Т-лимфоциты, СД-40-В-лимфоциты). Рецептор имеется на миелоидных клетках, эпителиальных клетках, на клетках плаценты, легочных фибробластах; в сыворотке больных раком. /6503/] IV. ФИБРОНЕКТИНЫ (от слов 'fibra' - волокно; 'necter' - cвязывать; с англ.) Это белки - 'мусоросборщики' (представляющие собой 'контейнер для мусора'). _Биохимия Группа нерастворимых на холоду гликопротеинов с М.400-450 кД. Димеры (с М. по 220 кД). 5% молекулы - углеводная часть (в т.ч. манноза, галактоза, N-ацетилглюкозамин, сиаловые кислоты). Концентрация - 300 мг/л. Содержание увеличивается при воспалении и уменьшается (вторично) при инфекционных процессах и сепсисе, хирургических вмешательствах, ТГС-синдроме, ожогах вследствии повышенного потребления. Концентрация фибронектина после его тотального удаления восстанавливается через 2 дня. Стабильно низкий уровень фибронектина ассоциирован с неблагоприятным прогнозом заболевания. [До одного года концентрация фибронектинов у детей низкая, затем достигает уровня взрослых и остается стабильной до 15 лет. С возрастом концентрация увеличивается примерно в полтора раза.] Делятся на растворимые (циркулирующие в виде димеров) и нерастворимые , соредоточенные в соединительной ткани. Располагаются на поверхности клеток соединительной ткани и базальной мембраны и в экстраклеточной жидкости мезенхимальных тканей. _Функции 1. Опсонин, обуславливая фибронектин-зависимый фагоцитоз (участвует в очищении раневой поверхности и воспалительного очага). Удаление фибронектина из крови приводит к снижению ее фагоцитирующих свойств в 2 раза. Рецепторы к фибронектину имеются на макрофагах и нейтрофилах. /7061/ Фибронектины связывают гликопротеиды - стафилококков (St.aureus), - стрептококков (группы А,С,G), - трепонемы паллидум /2745к/, - дрожжей, кандид, - вирусов - гриппа, парагриппа, паротита), - строму клеток, актин, коллаген, ДНК, фрагменты тканей, - иммунные комплексы, - гепарин, желатин, ионы кальция, компоненты С3 и С1q. [Тейхоевые кислоты Г+ бактерий микробов ингибируют связывание фибронектина с микробами, исключая перечисленные.] 2. Регулирует адгезию и пролиферацию мигрирующих клеток и эндотелиальных клеток; 3. Регулирует образование соединительной ткани: после травмы откладывается в местах повреждения вдоль нитей фибрина (синтезируемый эндотелиальными клетками и фибробластами); формирует криопреципитаты (фибронектин-фибрин) при ревматоидном артрите, системной красной волчанке, системном склерозе; _Синтез Синтезируются гепатоцитами, фибробластами, эндотелиальными клетками (+ макрофагами, нейтрофилами, тромбоцитами, миоцитами). . - 12 - V. БЕЛКИ ОСТРОЙ ФАЗЫ (БОФ; = адаптивные белки) [Острое активное воспаление длится до 2 недель; хроническое - более 1,5 месяцев. Для острого воспаления более типичны экссудативные реакции, для хронического - пролиферативные./420/] БОФ включают белки, содержание которых резко меняется в острую фазу воспаления: - 'негативных' снижается (преальбумин, альбумин, трансферрин, апоА1, апоА2, гистидин-обогащенный гликопротеин (гистидин является 'уборщиком' гидроксильного радикала /2319к/), интерa -ингибитор трипсина, a 2-HS-гликопротеин). - 'позитивных' значительно (даже тысячекратно) повышается. Для того, чтобы не повышалось онкотическое давление, пропорционально падает синтез альбуминов ('негативная реакция'). Наиболее ярким показателем воспалительного процесса являются орозомукоид, антитрипсин, СРБ, концентрация которых лишь в очень редких случаях не изменяется при остром воспалении. При остром воспалении в 2 и более раз повышается содержание фибриногена, гаптоглобина, орозомукоида. /2809к/85/ _Биохимия БОФ .. Большинство БОФ - гликопротеиды. М. БОФ - 12-340 кД, содержание углеводов - 8-45%. /6902/ Все БОФ, за исключением СРБ, являются сиаловыми кислотами. /6902/ Включают большое количество отрицательно-заряженных сайтов. /6902/ Синтезируются гепатоцитами. _Синтез стимулируется - ФНОa , - ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-11, - гамма-ИФ, - трансформирующим фактором роста (ТФРb ), - ciliary нейротрофическим фактором, - лейкемия-ингибирующим фактором, - бактериями и вирусами, - при аутоиммунных процессах, - пр тромбозах, - при травмах /6902/ _Синтез ингибируется - инсулиом, okadaic acid, - глюкокортикоидами (снижают уровень ИЛ-1 и повышают активность печени. Содержание БОФ В норме При остром воспалении СРБ (усл. ед.) 70 нг/мл,т.е. 0,1 г/л почти нет - у новорожденных 100 нг/мл с постепенным возрастанием Фибриноген 2-4 г/л 3-4 г/л 6-10 г/л Гаптоглобин (Нр) 170-300мг/л (70-150 мг%); 830-2700мг/л 0,1-0,04г% 0,6-1,8 г/л 3-6 г/л Преальбумин 300 + 20 мкг/мл Орозомукоид (Оm) 550-1400 мг/л = мкг/мл 0,6-0,9 г/л 1,5-3 г/л Антитромбин-III 210-300 мг/л С3-компонент 550-1200 мг/л комплемента 1,3-1,7 г/л 2-3 г/л /2809к/ 100 мг% С1q-субкомпонент 100% комплемента Трансферрин 3030 + 350 мкг/мл Церулоплазмин 260 + 30 мкг/мл 0,3-0,6 г/л 1-2 г/л альфа-2-макроглобулин 2150 + 150 мкг/мл (500-2500 мг/л) альфа-1-антитрипсин 2200 + 200 мкг/мл альфа-1-антипротеаз- 2,5-4,0 г/л 5-7 г/л ный ингибитор /???/ -? - 12,5% углеводов. Угнетает активность трипсина, химотрипсина, эластазы, коллагеназы, тромбина, плазминогена, ренина, в некоторой степени - калликреина. М. 50-55 - 13 - кД, поэтому легко покидает русло крови, выходит в интерстиций и взаимодействует с протеиназами ткани. Отличается высоким полиморфизмом. Дефицит сопровождается обструктивными легочными заболеваниями (эмфиземой легких) и прогрессирующим ювенильным циррозом. Забоелвание развивается у больных в возрасте 30-40 лет. Механизмы не ясны. Предположительно дефицит ингибитора сопровождается повышенным действием эластазы, коллагеназы нейтрофилов в месте начинающегося воспаления, что приводит к лизису основного вещества ткани легких и развитию обширных воспалительных очагов. /2809к/85/ + кининоген, прекининоген /?/ - ангиотензиноген /?/ БОФ делят на 3 группы: _А. Транспортные белки . (преальбумин и металл-содержащие белки, предотвращающие ПОЛ) В процессе воспаления при разрушении эритроцитов может выделяться Hb, стимулирующий процессы ПОЛ. - Преальбумин транспортирует витамины и гормоны. - Гаптоглобин /Hp; М. 40кД/ -- связывает свободный гемоглобин. Комплексы захватываются клетками РЭС /205/, не фиксируются клубочками почек, что предотвращает гемосидероз почек. /2809к/85/ Период полувыведения из крови комплекса Нв-Нр 10-20 минут. Комплексы распадаются в гепатоцитах печени. /2809к/85/ -- Участие в процессах детоксикации. Нр комплексуется с различными белковыми и небелковыми веществами, появляющимися при распаде клеток поврежденной ткани, в т.ч. с протеазами (например, катепсином В, D, некоторыми компонентами АПК). /2809к/85/ -- Иммунореактивный белок. -- Обладает иммунопероксидазной активностью. Синтезируется печенью и в тканях, входящих в состав рэс: селезенке, ЛУ, тимусе. Разделяют 3 типа белка : - - Hp 1-1 (М. 85 кД) , -- Hp 1-2 (М. ??????????????????) , -- Hp 2-2 (М. 160 кД) (у человека по одному из них). /205/ Недостаточность Hp встречается редко. /420/ Молекулярная структура напоминает строение иммуноглобулинов. /2809к/85/ -- Содержание повышается в 3-5 раз при инфекционных процессах /1695/ и развитии опухолевых процессов. Выявлена корреляция между концентрациями гаптоглобина и орозомукоида и диаметром опухоли. /269/ -- Уровень снижается при гемолитической анемии, не определяется после переливания несовместимой крови. /284/ При его недостатке может развиться пароксизмальная ночная или холодовая гемоглобинурия. - Гемопексин связывает свободный гем. - Трансферрины (в т.ч. лактоферрин) -- транспортируют железо к клеткам эритрона; ('негативный' белок); -- проявляют антимикробные свойства (связывают железо из питательной среды). - СОД (супероксиддисмутаза) - антиоксидант, - Церулоплазмин (ЦПЗ). М. 124-134 кД /2809к/85/. -- транспортирует медь в печень (экскреция с желчью для удаления из организма) и к медьсодержащим ферментам. /2809к/85/ -- стимулирует эритропоэз (является колониестимулирующим фактором); Связывает медь и т.о. осуществляет его детоксикацию. -- является акцептором супероксидных радикалов (ЦПЗ называют 'внеклеточной СОД'), т.е. осуществляет антирадикальную защиту. /6902/ _Б. Белки системы комплемента . - С3, С4, С1q, комплекс С56. С1q /?/ - стимулирует первичный иммунный ответ, С1-In С2,С4,С4вр , С3,С5,ф.В - в расщепленном виде являются опсонинами (С3в) и хемотаксическими агентами (С5а). С9 /7528/ _В. Белки со специфическими функциями - Факторы ССК ( фибриноген /предполагая активацию свертывающего процесса/, ф. Виллебранта); Фибриноген - белок, переходящий под действием тромбина в фибрин. М. 340 кД. Углеводный компонент составляет 4-5% массы белка. Свойства белка: -- участие в _свертывании крови .; продукты деградации фибриногена и фибрина обладают противосвертывающей актив- - 14 - ностью; что способствует восстановлению кровотока в зоне воспаления; -- в интерстициальной ткани фибриноген создает основу для фибробластов и гистиоцитов (в фибриновый матрикс мигрируют фибробласты) и способствует _заживлению ткани .; после синтеза коллагена в пораженном участке образуются новые капилляры и восстанавливается нормальное строение ткани; --- При недостаточности фибрин-стабилизирующего фактора (фактора XIII) раны долго (месяц) не заживают, а особи женского пола остаются бесплодными (кстати, гемофилии А нет у женщин). --- Тромбопластина много в яйцеклетке. -- повышенная концентрация фибриногена и фибрина в поврежденной ткани усиливает миграцию в нее гранулоцитов и в то же время они принимают на себя _основной удар . со стороны _протеиназ . лейкоцитов и повреждающих клеток ткани. --- Продукты расщепления фибриногена и фибрина являются хемотаксическими агентами, приводящими к скоплению в месте повреждения лейкоцитов. Активированные лейкоциты начинают продуцировать ряд физиологически активных веществ (интерлейкины, фактор некроза опухолей, факторы роста, интерфероны), роль которых сначала заключается в стимуляции синтеза соединительно-тканных элементов и пролиферации (деления) клеток, а затем после изменения соотношения регуляторов начинается вторая фаза регенерации - выброс коллагеназы для растворения лишней соединительной ткани и запуск механизма апоптоза - самоубийства клеток. В литературе описана версия, что у лиц при сниженной апоптозной способности клеток в данный период может инициироваться опухолевый процесс. - Орозомукоид (его содержание повышается при онкологических заболеваниях). М. 44 кД. 40% массы составляет углеводный компонент. Ингибирует катепсин С. Функция неизвестна. /2809к/85/ Ингибиторы ферментов (лизосомальных ...): - a 1 -антитрипсин - a 1 -антихимотрипсин - a 2 -антиплазмин - кофактор II гепарина - ингибитор активатора плазминогена - антитромбин-III - a 2 -Макроглобулин М. 725 кД; состоит из двух идентичных /?/ субъединиц (по др. данным - 10 субъединиц). Содержание - 2-4 г/л. /6224/ Ингибирует плазмин, тромбин, калликреин, ферменты классического пути активации комплемента; синтезируется вне печени. a 2-макроглобулин связывает все чужеродные лектины.Рецептор-подобные молекулы к a 2-МГ являются рецепторными молекулами для экзотоксина Рseudomonas. /7546/93/ Альфа-1-антитрипсин защищает ткани легких от протеолитического разрушения эластазой нейтрофилов. Синтезируется преимущественно клетками паренхимы печени. Врожденный дефицит ингибитора (норма 2,4 г/л) является причиной развития эмфиземы легких во взрослом возрасте. Недостаточность связывается с возникновением бронхиальной астмы. Синтез патологического Z-мутанта (в отличие от нормального М-типа) сопровождается болезнями печени - от холестаза у новорожденных до цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы у взрослых. /2372к-х/ Другие белки : /7237/94/ - СРБ (см. ниже) - амилоид Р (см. ниже) - ЛПС-связывающий белок - a1-кислый гликопротеин - heme oxygenase - манноза-связывающий белок - лейкоцитарный белок 1 - Апо(а) обладают антиоксидантной активностью. Концентрация при воспалении повышается с 2 до 280 мг%. Апо(а) удаляется из кровотока путем связывания с ГЗГ (=глюкозаминогликанами) внеклеточного матрикса стенки артерий и последующего поглощения макрофагами. Связываются с ЭК, лимфоцитами, фибрином, продуктами деградации фибрина (пдф), фибронектином, эластином, ГЗН-ми. Апо(а) удаляется из кровотока путем связывания с ГЗГ внеклеточного матрикса стенки артерий и последующего поглощения макрофагами. /6902/ С-РЕАКТИВНЫЙ БЕЛОК (СРБ) /7483,2854,7965/ Открыт в 1930г. Маркер острого воспалительного процесса. _Биохимия СРБ - лектин антигалактанового типа с М. 118-144кД. Семейство белков - пентраксинов. Не гликопротеид. Состоит из 5 (6-?) идентичных (циклических-?) субъединиц (с М. по 21,5кД /23кД-?/), связанных нековалентно между собой. На - 15 - каждой субъединице по одному фосфохолин-связывающему центру и по одному ФХ-независимому центру. /7489/ Связывает - полисахарид-С пневмококка, - фосфатидилхолин (в капсуле пневмококка-???) через ионы Са 2+ . - Полимерная форма - п-СРБ. Пентамерный (нативный) СРБ обладает противовоспалительным действием. /1691к/ - мономерная форма - м-СРБ. Мономерный СРБ обладает провоспалительным действием, - тафтсиноподобные пептиды - А,Б,В (по 4 аминокислотных остатка). Время полужизни - 4 часа. /7490/ _ Синтез Синтезируется лимфоцитами (моноциты не продуцируют), гепатоцитами в ответ на эндогенные пирогены. /7482,7485/ Индуцируется /7965/ - ИЛ-1, - травмой, - облучением, - микроорганизмами. Синтез регулируется интерлейкинами и половыми гормонами. Высокая концентрация СРБ наблюдается при кортикостероидной терапии. /2809к/85/ _Свойства 1. Служит опсонином (через комплемент тоже) и производит детоксикацию организма./7491/ Повышает функциональную активность фагоцитов. Рецептор для С-РБ имеется в основном на клетках с Fc-рецепторами (100% моноцитов, нейтрофилах /6154/, 2% Т-лимфоцитов, на В-лимфоцитах нет). /7487/ Осуществляет клиренс - микроорганизмов, - 'старых', поврежденных и некротических клеток и их продуктов, - связывается с ДНК, нуклеотидами, - липидами, ЛПНП, ЛПОНП, - ПС (остатками галактозы) /7488/. /7965/87/,7580/ - фибронектином /6149/ - лецитином, - сфингомиелином некротизированных тканей - ПС-С стрептококков, - холинфосфатидом, - лектином + протамины, гистоны, + основные белки миелина, + катионные белки лейкоцитов 6 активация комплемента с С5- ?. /297/ 2. Комплекс С-РБ с лигандом запускает КПК и АПК. /7584,3169,2854;7965/ Провоспалительное действие. /1691к/ СРБ приводит к фиксации на комплексах комплемента (С1q, С2, С4, С3,), в результате чего общая гемолитическая активность сыворотки снижается на 80%, а компонентов С3-С9 - на 45-66%. /1584/ 6 С3-зависимый фагоцитоз комплексов. /297/ Мономерный СРБ оказывает провоспалительное действие, нативный пентамерный - противовоспалительное действие. /2256к/96/ 3. СРБ in vitro в концентрациях 50-250 мкг/мл обладает выраженным митогенным действием в отношении лимфоцитов. Митогенные свойства теряются при блокаде фосфорилхолиновых сайтов связывания СРБ. /2274к/94/ CРБ усиливает спонтанную пролиферацию лимфоцитов in vivo. /2808к/96/ 4. Запускает реакцию преципитации и агглютинации; (артефакты в реакция агглютинации с микробами) 5 . Регулирует активность лимфоцитов, моноцитов, гранулоцитов, тромбоцитов и эритроцитов (всех форменных элементов крови)./6149/ Стимулирует активность ЕКК (тормозит опухолевый рост); стимулирует противоопухолевую активность макрофагов. /7965/ 6. СРБ является слабым хематтрактантом для нейтрофилов. Эти свойства могут быть связаны с тафтсиноподобными пептидами, образующимися при протеолизе СРБ под действием лизосомальных ферментов. /2365к/ Поглощенныые нейтрофилами СРБ слудит хемоаттрактантом для нейтрофилов и обеспечивает их привлечение в очаг. Сущность механизма проникновения нейтрофилов в воспалительный очаг состоит во _взаимодействии СРБ с фибронектином и _ламинином . соединительной ткани, его накопление в очаге воспаления и распаде на мономеры под действием кислотных условий очага. /2365к/ 7 . Ингибирует агрегацию тромбоцитов. Т.о., С-РБ выполняет функцию АТ на ранних стадиях воспалительной реакции (эволюционный предшественник антител). Сходство с антителами: 1. опсонин 2. активация комплемента 3. РА и РП 4. Хемотаксин _Содержание - 16 - - У новорожденных - 0,1 мг/л (15-6000 мкг/л сыворотки у здоровых новорожденных). Корреляция между концентрацией СРБ в сыворотке матери и сыворотки новорожденного отсутствовала, что указывает на эндогенное происхождение СРБ новорожденного. /2362к/ Увеличение концентрации СРБ у новорожденных до 10 мг/л свидетельствует о наличии инфекционной патологии (пневмонии, сепсиса, бактериальной кишечной инфекции). /7486/ - Концентрация СРБ в сыворотке здоровых детей в возрасте не изменялась. /2362к/85/ У детей в возрасте 1 месяца - 150 мкг/л, у детей 8-12 лет - 170. - У взрослых - 470 (мкг/л). (др. - 3 мг/л) В нормальной сыворотке этот белок не определяется (содержание 10 мг/л). Во время воспаления и при деструкции тканей концентрация увеличивается в 20 раз и более (до 200 мг/л = 200000 мкг/л и более); содержание СРБ отражает интенсивность патологических процессов. Повышается с возрастом. При сепсисе концентрация СРБ превышает 10 мг/л. /2362к/85/ Предполагается, что роль СРБ заключается не столько в выведении лиганда, сколько в изменении его распределения в организме. /7490/ При гиалиновой мембранной болезни и при желтухе концентрация СРБ не возрастает. /2362к/ _Определение. Метод кольцепреципитации. АМИЛОИД Р - БОФ, родственный СРБ-ку. /1691к/ Структура. СРБ состоит из одного 5-членного кольца, сывороточный амилоид Р - из 2-х состыкованных колец. Молекулы возникают в результате дупликации общего гена. Продуцируются гепатоцитами под действием ИЛ-1, ИЛ-6. /1691к/ _Свойства. . - Обладает устойчивым противовоспалительным действием. - При связывнии с хроматином и гистонами активирует комплемент по классическому пути. - Участвует в формировании фибриллярного компонента бляшек, - ингибирует эластазу (препятствует разборке амилоида). /1691к/ - опсонизатор элиминации модифицированного ЛПВП из крови. Уровень в норме - 40-70 мкг/мл сыворотки, при ревматоидном артрите, коллагенозах, амилоидозах уровень увеличивается в 2-4 раза. /1691к/ VI. ИНТЕРФЕРОНЫ /6195/ (от лат. inter - между, ferens - несущий; от явления, когда организм или клетка, инфицированные одним вирусом, становились нечувствительными к заражению другим вирусом) ИФ открыты в 1957г. Айзексом и Линдеманном. Интерфероны (ИФ) - секреторные видоспецифичные белки, синтезируемые клетками и обладающие противовирусными и противоопухолевыми свойствами. ИФ - гетерогенные белки (М.20-40кД; альфаи бета-ИФ включает 166 аминокислот, гамма - 146) гликопротеидной природы. Выделяются в виде предшественников. /7954/92/ _Выделяют 3 вида ИФ: альфа - из культуры лейкоцитов 1-ый тип - синтезируются лейкоцитами и кератиноцитами, бета - из культуры фибробластов - синтезируются фибробластами, кератиноцитами, эпителиальными лейкоцитами /1666к/94/ гамма - из культуры активированных митогеном 2-ой тип или антигеном Т-лимфоцитов (иммунный ИФ). - синтезируется активированными Т-лимфоцитами и ЕКК. /2461к/ Гамма-ИФ вырабатывается в Т-лимфоцитах-хелперах под действитем специфического антигена, растительных митогенов, форболовых эфиров. /7954/92/ Концентрация в крови - 2 МЕ/мл 1 МЕ (международная единица) - количество ИФ, защищающее культуру клеток от 1 ЦПД 50 вируса. У грудных детей концентрация ИФ несколько выше. /7481/ _Синтез . осуществляется всеми клетками организма (в большей степени клетками рэс) и стимулируется - вирусами, бактериями, эндотоксинами, - фрагментами собственной ДНК, (дибазолом), двунитевой РНК, - клетками РЭС , - в красном костном мозге колониестимулирующим фактором /КСФ/ /7954.../ Продукция ИФ инфицированными клетками может предохранять прилегающие клетки от последующего инфицирования. Отмечено эволюционное родство альфа-2-интерферона и альфа-1-тимозина, которые экскретируются клетками ИС, а также синаптическими мембранами клеток головного мозга. /1652к/ Бета-ИФ предположительно может являться природным антигонистом КСФФ, тормозя сверхпролиферацию гемопоэтических клеток и - 17 - ускоряя их созревание. /7954/92/ _Рецепторы Альфа и бета-ИФ имеют общий рецептор. /1666к/94/ Рецепторы /R/ для ИФ (гликопротеины) + ИФ 6 активация фосфолипазы А2 6 метаболизм арахидоновой килоты под действием эпоксигеназы в эйкозаоиды, которые стимулируют образование индуктора транскрипции. /7954/92/ _ Функции (В основном антимикробное и иммуномодулирующее действие). 1. _Стимулируют ИС . (повышают продуцию АТ /в избытке ИФ - подавляют/, В-лимфоциты). - Стимулирует АПК (антигенпрезентирующие клетки) и их микробицидную активность. Под влиянием бета-ИФ моноциты/макрофаги активно синтезируют ФНО_альфа, который усиливает цитотоксические функции у моноцитов/макрофагов и киллерную активность у ЕКК. /2348к/ - Стимулирует созревание В-лимфоцитов в плазматические клетки /7954/92/. Усиление активации АТ-образования. /2292к/ - Подавляет ГНТ и ГЗТ, но в момент индукции - стимулируют аллергию /2126к,2157к/. - Усиление адгезии лимфоцитов на ЭК. /2272к/ 2. Ингибитор роста и пролиферации клеток /2230к/96/ -- _ Антипролиферативное действие . ИФ на клеточный рост (нормальных и злокачественных клеток /2126к/) зависит, по меньшей мере, от синтеза индоламино-2,3-двуоксигеназы, расщепляющей триптофан, необходимый для роста клеток эукариот, в т.ч. внутриклеточных паразитов - простейших. /7954/92/ - Препятствует росту простейших и паразитов . - Подавление репродукции _вирусов . вследствии нарушения инициации синтеза вирусных белков (иРНК не прикрепляется к рибосоме). При этом функции клетки сохраняются. (Торможение репликации вирусов в клетке связано с индукцией ИФ-ом таких ферментов, как олигонуклеотидсинтетаза /ОС/ и протеинкиназа. ОС в присутствии 2-нитевой РНК синтезирует из АТФ 2'5'-адениловые олигомеры, активирующие РНКазу L, действующую на РНК вирусов и самой клетки. Протеинкиназа фосфорилирует альфа-субъединицу инициирующего фактора, препятствуя трансляции вирусных белков. /7954/92/) - _Активирует ЕКК . (естественные клетки-киллеры) /7954/92/; - _Антибактериальное . действие (преимущественно на Г+ микрофлору): нарушает размножение микробов в течение 10 минут инкубации с бактериальной структурой. /2126к/ - (Подавляет _инвазию клеток ., вызванную Eimeria tenella и S.typhimurium, подавляет репродукцию малярийного плазмодия, токсоплазм, риккетсий, лейшманий, трипаносом, листерий, хламидий, микобактерий и др. Повышает неспецифическую резистентность к инфекциям, вызванным Kl.pneumoniae, L.monocytogenes и др. /7073/) 3. Активирует фагоциты /7680/89/. Повышает цитотоксической активности _ макрофагов . . Усиливает синтез Fc-рецептора /7954/92/. - Гамма-ИФ усиливает продукцию ФНО-альфа. /2461к/ - Активирует _фосфолипазу А2 . с образованием эйкозаноидов /6195/, стимулирует продукцию нитроксидных радикалов. /2461к/ - Усиливает синтез и экспрессию HLA антигенов I (альфа, бета-ИФ) и II (гамма-ИФ) классов /7954/92/; - Усиление мобилизационных реакций нейтрофилов. /2292к/ 4. Ослабление продукции ГМ-КСФ. 5. Пирогенность (прямое действие на гипоталамус). /2292к/ 6. Синергетические эффекты с ФНО и другими цитокинами. /2292к/ 7. Усиление экспрессии адгезивных молекул на ЭК и лейкоцитах. /2292к/ 8. Усиление ЛПС-индуцированной секреции макрофагами ФНО, ИЛ-1, ИЛ-6; усиление биоцидности макрофагов и экспрессии ФНО-рецепторов. /2292к/ _Получение . ИФ видоспецифичны (ИФ одного вида животных не подавляет размножение вирусов у другого вида животных), но не вирусоспецифичны. 3 метода получения ИФ: (Из крови не получают, так как для получения одного грамма ИФ из крови необходимо обработать 100 тысяч литров крови.) 1. Химический синтез активной части молекулы; 2. Включением гена ИФ в бактериальные клетки (Е.с.); выделяют из экстракта осадка клеток Е.с. аффинной хроматографией (на колонке с МАТ); = интерферон А. Схема получения: накопление рекомбинантного штамма (1-2 суток), отделение биомассы, разрушение структур, ресуспендирование в буфере, ультрафильтрация, аффинная хроматография супернатанта на колонке с моноклональными антителами, промывка колонки, срыв ИФ 2М NaCl-?, лиофильная сушка и стандартизация. 3. Выделение из культуры лейкоцитов, фибробластов и других клеток: - 18 - Схема получения: культуру клеток заражают одним из непатогенных для человека виросов (вирусы Сендай, болезни Ньюкастля, везикулярного стоматита), через сутки центрифугируют, надосадок очищают аффинной хроматографией, ультрафильтрация (для удаления вирусов-?), лиофилизация, стандартизация. Длительное введение рекомбинантных ИФ стимулирует образование у 30% больных АТ к ИФ. Природные ИФ практически не иммуногенны. /7492/ Другие противовирусные ингибиторы - липопротеиды, мукопротеин (альфа), подавляющие активность вирусов полиомиелита, клещевого энцефалита, миксовирусов, подавляя адсорбцию вирусов к клетке. VII. ЛИЗОЦИМ Открыт Флемингом в 1922г. _Биохимия Это низкомолекулярный (М.15 кД) щелочной фермент - мурамидаза (бета-глюкозаминидаза), гидролизирующий связь N-ацетилмурамовой кислоты и N-ацетилглюкозамина, содержащиеся в клеточной стенке некоторых микроорганизмов (растворяет мукополисахариды). /6528/89/ 130 аминокислотных остатков. _Синтез Синтезируется фагоцитирующими клетками (моноцитами, макрофагами, полиморфоядерными лейкоцитами), накапливаясь в гранулах и лизосомах, затем поступает в плазму, синовиальные оболочки и выделяется преимущественно со слюной, слезной жидкостью и молоком. Высвобождение лизоцима из клеток кальций (Са 2+ )-зависимо. _Функции - Лизирует многие сапрофиты, например, Micrococcus lysodeicticus, и некоторые патогенные бактерии, поврежденные антителами и/или комплементом. Значение лизоцима как микробицидного фактора невелико в связи с весьма ограниченным его антибактериальным спектром, который включает в основном сапрофитные бактерии. /350/84/ Антимикробное действие лизоцима распространяется главным образом на _Г+ кокки .. /7073/-? Кроме лизоцима микробицидную активность могут проявлять и другие гидролазы: аргиназа, гликозидаза. /350/84/ Лизоцим проникает до пептидогликанового слоя и разрушает цитоскелетные элементы. - Лизоцим у крупного рогатого скота в преджелудках и у травоядных обезьян выполняет сходные функции в ферментации растительной пищи в ЖКТ. /7959/87/ - Фрагмент лизоцима Thr-Leu-Lys-Arg обладает иммуномодулирующими свойствами (предположительно). /7960/87/ Лизоцим ингибирует лимфобластогенез и пролиферацию клеток в СКЛ. /7961/86/ Лизоцим способствует репаративным процессам. /7073/ Активирует фагоцитоз и хемотаксис лейкоцитов. /7073/ _Содержание Лизоцим содержится в слезах, крови, бронхиальном секрете, молоке, курином белке и в икре разных рыб. Особенно много лизоцима в слюне животных (зализывание ран животными). Этим может объясняться относительно легкая заживляемость ран и царапин в ротовой полости, например, после удаления зуба). /293/ - В крови - 2 мг/л (порядка 1 мг/мл). При беременности у человека индуцируются большие количества лизоцима, который обнаруживается в плаценте, матке, амниотической жидкости, семенной плазме, цервикальной слизи. /7982/85/ В женском молоке лизоцима в 100 тысяч раз больше, чем в коровьем. - В слезной жидкости в 150 раз больше (устойчивость роговицы особенно к кокковой микрофлоре; в отношении некоторых кокков слеза действует в разведении в 10 млн раз /293/). - Уровень лизоцима наиболее высок в сыворотке новорожденного; держится на высоком уровне до 3 лет, затем с возрастом содержание падает. - В куриных яйцах (лизоцим белка служит надежной защитой против весьма опасной для него стафилококковой инфекции). /293/ Лизоцим полностью обусловливает бактерицидные свойства свежих яиц. _Определение активности . имеет определенное диагностическое значение при гематологических (лейкоз, гранулематоз), нефрологических, инфекционнных и эндокринных /диабет/ заболеваниях. /6528/ В качестве стандарта для определения количества (титра) лизоцима в испытуемом материале служит культура микрококка (лизодеинтикус). /293/ _Антилизоцимная активность микробов . считается фактором патогенности. Высокая степень антилизоцимной активности показана для менингококков, особенно серогрупп А, В и С. /2381к/ _Лизоцимная активность микроорганизмов Известно, что лизоцимная активность присуща многим бактериям (Ги Г+). Функция - регуляция экологии бактерий. /6339/ Наиболеее выраженной лизоцимной активностью обладает - штамм синегнойной палочки (40%). - Патогенная кишечная палочка выделяет только от больных (активность в 33%). - У стафилококков внешней среды лизоцим обнаружен в 23%, а от больных - 31%. - 19 - - Некоторые сальмонеллы. VIII. КАТИОННЫЕ БЕЛКИ Катионные белки (фагоцитин, лейкин и др.) содержатся в азурофильных и специфических гранулах нейтрофилов и высвобождаются как в просвет лизосом, так и внеклеточно. При активации нейтрофилов содержание белков падает. При незавершенном фагоцитозе высвобождение затормаживается. /2723к/ _Биохимия Насчитывается 7 белков, обусловливающих бактерицидное действие. К ним относятся альфа-,бета-,L-лизины (лизоцим, лактоферрин), гистоны, протамины, щелочные полипептиды. Катионные белки на 50% состоят из гидрофобных аминокислот и в избытке содержат аргинин и лизин. Некоторые из катионных белков по своему противомикробному действию напоминают полимиксин В и инактивируют Гбактерии. /7664/84/ М. бета-лизинов - 6кД. _ Содержатся .в лизосомах лейкоцитов (ткани почек, селезенке, легких, головного мозга, надпочечников) и тромбоцитов./272-39/ Их нет в лизосомах других клеток. _Свойства - вызывают повышение проницаемости клеточной стенки бактерий в присутствии кислорода /анаэробы устойчивы к катионным белкам/ (положительно заряженные белки сорбируются на отрицательно-заряженных поверхностях); тем самым облегчается проникновение лизосомальных ферментов в цитоплазму поглощаемых частиц. В настоящее время особо важное значение придается дефензинам - богатым аргинином белкам, которые обладают способностью встраиваться в липидный слой клетки, нарушать ее проницаемость и убивать широкий спектр бактерий, грибов и даже вирусов. /2291к/ - ПОВТОР - или вызывают агрегацию лигандов (инактивируя т.о. микроорганизмы)./272/ - Щелочные полипептиды эозинофилов участвуют в лизисе паразитов. /7073/ - Лактоферрин связывает железо и оказывает бактериостатическое действие (цитохромы). Инактивируют Гмикроорганизмы ( и некоторые Г+, например, бациллы), отчасти кандиды. /272-37/ Катионные белки высокоактивны против кандид и Г+ бактерий, в то время как Е.с. и Salm.typhimuium более устойчивы к их действию. /350/84/ Катионные белки альвеолярных макрофагов высокоактивны против кандид и Г+ бактерий - Г+ бацилл и др. (Гкишечная палочка и сальмонеллы устойчивы к их действию). _Синтез Основными продуцентами бета-лизинов служат тромбоциты, степень разрушения которых при свертывании крови коррелирует с возрастанием уровня бета-лизинов. IX. NO - (окисел азота) Высвобождение оксида азота (NO) из лейкоцитов, эндотелиальных, тучных клеток, нервных окончаний оказывает мощное - микробицидное, - цитоцидное, - противовоспалительное, - противоишемическое, - противотромботическое, - цитопротективное действие. /2734к/ Слюной поддерживается нормальный уровень генерации NO в тканях полости рта. /2734к/ Синтез происходит только в присутствии L-аргинина, который является исходным продуктом, подвергающимся воздействию NO--cинтетазы. NOявляется промежуточным продуктом превращения L-аргинина, окончательный же продукт - NO 2 , по уровню которого в моче или культуральной жидкости можно судить об интенсивности синтеза. /2294к/ Синтез индуцируется ФНО, ИЛ-1 и др. /2372к-х/ Альфа-ФНО активирует NO-синтетазу, вызывающей образование NO-реактивных метаболитов. ИЛ-10 ингибирует NO-синтетазу. /2294к/95/ Пути генерации окиси азота и супероксиданиона в фагоцитах конкурентны: продукция окиси азота (опухольинфильтрирующими макрофагами) сопровождается уменьшением продукции супероксиданиона (в перитонеальных макрофагах наоборот). /2445к/98/ Высокая активность нитрооксид(NO)cинтетазы обнаружена в нейронах. Обильную NO-ергическую иннервацию получают артериолы подслизистой основы и слизистой оболочки пищевода. NO-синтетаза, как фермент энергетического обмена, появляется у анаэробных организмов в докислородную эру жизни. Затем формируется холинергическая передача. У аэробов NO-ергическая иннервация выполняет функцию или медиатора, или модулятора нервных импульсов в нейронах, исторически более старых генераций. /2306к/98/ - 20 - NO, образуемый из L-аргинина специфической синтетазой в нейронах и ЭК, участвует в нейротрансмиссии и вазодилатации, препятстсвует адгезии и агрегации тромбоцитов. Гиперпродукция NO в самых различных тканях в условиях септического шока, обусловленного Гфлорой, сопровождается усиленным лизисом бактерий активированными макрофагами, падением артериального давления и угнетением функциональной активности миокарда - характерными проявлениями гиподинамической стадии септического шока./2372к-х/ NO также является одним из медиаторов в развитии респираторного дистресс-синдрома взрослых. В результате реакции между NO и супероксидным анион-радикалом образуется пероксинитрит, выполняющий роль цитокина при различных патологических процессах и болезнях. _Ингибиторы NO . оказались эффективными в лечении эндотоксемии и предупреждении при этом расстройств гемодинамики, но усиливают повреждение печени. С другой стороны, NO образует комплекс с гемовым железом цитохрома Р-45- и инактивирует этот ключевой фермент монооксигеназной системы печени, объясняя резкое уменьшение содержания цитохрома Р-450 в печени крыс в условиях экспериментальной эндотоксемии. /2372к-х/ X. ЛЕКТИНЫ Это белки, способные связываться с определенными моносахаридными звеньями в полисахаридах и гликопротеидах (т.е. это углеводсвязывающие белки). [Связывание обратимое и необратимое.] Термин введен Бойдом (W.C.Вoyd) в 1954 году. В последнее время предполагается термин аффинитины. Развивается наука - лектинология. _Биохимия По природе лектины являются гликопротеинами; в качестве небелковой компоненты содержат углеводы (3-80%, в среднем 3-10%) и ионы металлов (ионы кальция, марганца, в небольшом количестве ионы цинка, магния и пр.). [Исключение - конконавалин А и лектин гороха не содержат углеводов.] Удаление металлов сопровождается потерей биологической активности, после удаления углеводной компоненты активность сохраняется. Лектины - многовалентные лиганды с 2-4 центрами связывания. 6 Склеивание клеток. _Функции 1. Связывают и удаляют (эндоцитоз) из кровотока следующие частицы (вирусы, токсины микробов, иммунные комплексы, образованные иммуноглобулинами А и G, факторы роста, трансферрин, транскобаламин, ЛПНП; Рецепторы лектинового типа имеются на фагоцитах клеток печени и селезенки. Маннозо-6-фосфатные рецепторы принимают участие в сортировке лизосомальных ферментов. 2. Рецепторы к лектинам имеются на Т-лимфоцитах (экспрессия увеличивается под действием гормонов тимуса и нейраминидазы), стимулируют хоминг предшественников Т-лимфоцитов в тимус. /7507/ 3. Лектины и лектиновые рецепторы ИКК участвуют в формировании аллергической реактивности. Показано, что образование комплекса лектин-лектиновые рецепторы на поверхностной мембране лимфоцитов может блокировать АГ-связывающие рецепторы последних. 4. Cпособны вызвать агглютинацию клеток (агглютинация эритроцитов рицином вызывает мгновенную смерть) или их митогеную стимуляцию (что используется в серологиии) Например, Соn A - конконавалин А (из семян Сanavalin ensifermis) - митоген для Т-супрессоров, лектин лаконоса - митоген для Ти В-лимфоцитов (стимулирует ответ В-лимфоцитов на тимусзависимый антиген); джекалин выделен из экстракта хлебного дерева; - митоген для Т-хелперов (CD4+);активатор В-лимфоцитов; избирательно связывает только Ig A (используется для аффинной хроматографии); /7493/90/ фитогемагглютинин (ФГА)-митоген для Т-супрессоров; получают из экстракта Phaseolus (vulgaris или communis); лектин Helix pomatia связывается с АГ А эритроцитов, и преимущественно с Т-лимфоцитами клещевины (рицин) - агглютинирует эритроциты, 5 . Некторые лектины активируют КПК в сыворотке человека. 6. Обеспечение специфических межмолекулярных и межклеточных взаимодействий (особенно у растений); 7. Транспорт и накопление углеводов . 8 . Лектин гороха (связывает БОФ - альфа-1-антитрипсин, церулоплазмин, гаптоглобин, гемопексин), иммуноглобулины М,G,А; Все чужеродные лектины связывает альфа-2-макроглобулин. Примеры . В основном это растительные белки, тем не менее лектинопо- - 21 - добные белки обнаружены и среди животных и микробов. Лектины человека. Лектиноподобными белками человека являются С-РБ, субкомпонент С1q комплемента, СR3 (рецептор для фрагментов С3 компонента комплемента - С3d и ? ); тромбоспондин тромбоцитов, фактор VIII/фактор Виллебранда, лектины и лектиновые рецепторы на макрофагах печени и селезенки. Растительного происхождения: Лектины найдены у более чем 800 видах растений (особенно семейства бобовых). Лектинами высших растений являются - Соn A, G (выделен из семян Сanavalin ensifermis) - митоген для Т-супрессоров, [удлиняет протромбиновое время; связывается с D-маннозой; 4-валентный тетрамер]; - лектин лаконоса - митоген для Ти В-лимфоцитов (стимулирует ответ В-лимфоцитов на тимусзависимый антиген); - джекалин - митоген для Т-хелперов (CD4+); активатор В-лимфоцитов; избирательно связывает только Ig A (используется для аффинной хроматографии); выделен из экстракта хлебного дерева. /7493/90/ - фитогемагглютинин - митоген для Т-супрессоров; получают из экстракта Phaseolus (vulgaris или communis); - клещевины (рицин), - семян чечевицы, эспарцета, лектин конских бобов, - лектин гороха (связывает БОФ - альфа-1-антитрипсин, церулоплазмин, гаптоглобин, гемопексин), иммуноглобулины М,G,А; - агглютинин из зерен пшеницы (удлиняет протромбиновое время (связывает факторы IX, X, и II); - лектины хлебного дерева, - семян сои, - корней ячменя, и др. /7171/94/ Микробного происхождения: Лектинами являются белок gp120 вируса иммунодефицита человека, коклюшный токсин, дифтерийный токсин, молекулы адгезии кишечной палочки, энтеротоксин кишечной палочки, пилин гонококков, токсин шигеллы дизентерия, холерный токсин, гемагглютиJ. pseudotuberculosis, адгезин дизентерийной амебы. /7171/94/ Лектины грибов и дрожжей. Животного происхождения: Лектины выделены из морских беспозвоночных (м.ежей, губок, м.желудя, японского краба), насекомых (таракана, мясной мухи, угря, корюшки), земноводных (икры лягушки-быка и других лягушек), пресмыкающихся (яда змей), птиц (кожи эмбрионов, белок хряща, лектин печени), млекопитающих (лектин сердца, легких, нейроглии спинного мозга, лизосомальные рецепторы, молекулы фибробластов, естественных клеток-киллеров, эндотелиальных клеток - тромбомодулин, клеток гепатомы, тромбоцитов; ИЛ-2, рецептор для IgЕ лимфоцитов, гликопротеин, связывающий вирус иммунодефицита человека, рецепторы плаценты, макрофагов, купферовских клеток, лектин семенной жидкости, киллерных клеток, протеогликаны хрящей, альфа-амилаза и Са-связывающий белок поджелудочной железы и др. . /7171/94/ Колектины - гуморальные лектины, находящиеся у млекопитающих и птиц. Это олигомеры, состоящие из трех полипептидных цепей, включающие коллагеновый и С-терминальный лектиновый домен. |