Подобные работы

Оказание первой медицинской помощи при открытом переломе нижней трети костей голени

echo "Сперва нужно понять вид кровотечения, для того чтобы определить как дальше действовать. Это может быть артериальное, венозное и капиллярное кровотечение. Наиболее опасно артериальное кровотечен

Методическая разработка по практическому занятию для студентов лечебного факультета

echo "Студент должен уметь: · Обращаться с функциональной кроватью; · Обеспечивать тяжело больному удобное положение в постели; · Осуществлять смену постельного и нательного белья; · Правильно осущест

Псориаз

echo "Свойственное псориазу шелушение объясняет его другое название – «чешуйчатый лишай». Псориазом страдает до 2% всего населения земного шара. Заболеваемость выше в условиях низкой температуры и вы

Интерлейкины

echo "Снижение тей образования Ig G-ответа, активности цитотоксичных Т-лимфоцитов при вирусных инфекциях. ИЛ-10 Анемия, воспалительные заболевания кишечника ИЛ-12 Ослабление образования Тh1 Рецепторы

Возрастная иммунология

echo "Обобщение данных литературы позволили очертить границы возраста: для женщин - 45, для мужчин - 50 лет. /1652к/ Максимальная функциональная активность иммунной системы наблюдается в возрасте 15 л

Лимфоциты

echo "Лимфоциты утрачивают поверхностные комплексы ТсR-CD3, снижается экспрессия CD4 и, в меньшей степени, CD8. (Ингибирование АКС стауроспорином предотвращало снижение экспрессии АГ-ов CD3 и CD4 в от

Иммунология. Общие принципы и понятия. Иммунитет, его виды, стимуляторы, индукторы, цитотоксичность, апоптоз, киллинг, адгезия, интегрины, селектины, миграция, хоминг и многое другое

echo "Иммунитет - это механизм, регулирующий отношения между 'своими' и 'чужими' антигенами и их носителями. Иммунитет есть свойство индивидуума, обеспечивающее защиту организма от генетически чужеро

Все об антигенах

echo "Антигенные детерминанты - участки антигена, которые взаимодействуют с антителами. Например, некий белок человека отличается от аналогичного белка обезьяны по одной аминокислоте, т.е. имеет одну

Факторы неспецефической защиты - продолжение: Эндоцитоз, экзоцитоз, фагоцитоз, фагоцитарная активность

Факторы неспецефической защиты - продолжение: Эндоцитоз, экзоцитоз, фагоцитоз, фагоцитарная активность

Исторический аспект Явление фагоцитоза открыл И.И.Мечников в 1893г., наблюдая как клеточные личинки морской звезды поглощают краску), за что ему в начале века была присуждена Нобелевская премия.

Только что введеннные в кровь бактерии моментально исчезали из нее. /293/ До 1969г. фагоцитирующие клетки включали в т.н. ретикуло-эндотелиальную систему, а в 1969г. R.van Furth и соавт. предложили термин 'система мононуклеарных фагоцитов' (СМФ). Гистологический аспект Система мононуклеарных фагоцитов (СМФ) включает: - клетки Купфера печени, альвеолярные макрофаги, гистиоциты соединительной ткани, клетки микроглии цнс, остеокласты, макрофаги лимфатических узлов, селезенки. 85-95% фагоцитирующих клеток организма сосредоточено в печени и селезенке. СМФ делится на 1. внутрисосудистую (гистиоциты селезеночной пульпы, костного мозга и лимфатических синусов) и 2. тканевую.

Последняя в нормальных условиях состоит из покоящихся клеток (длительность жизни от 20 до 60 дней), становящихся активированными гистиоцитами в случаях агрессии. /5987/86/ Активация СМФ происходит под действием ряда бактериальных продуктов, токсинов, иммунных комплексов, стимулированных Т-лимфоцитов, лимфокинов. И.И.Мечников подразделил фагоциты на микрофаги (гранулоциты) и макрофаги. 1. Микрофаги имеют запас гликогена, поэтому обеспечивают основную защиту в анаэробных условиях (в очагах гнойного воспаления при острых инфекциях). Снижение числа нейтрофилов ниже 25% от нормы опасно для жизни. /2269к/ Фагоцитоз у макрофагов /моноцитов/ протекает медленнее, чем у ПМЛ, но бактерицидная активность выше, чем у ПМЛ. /7073/ 2. Макрофаги делятся на подвижные и оседлые. а) Подвижные, циркулирующие макрофаги (моноциты крови, гистиоциты, полибласты) осуществляют хемотаксис.

Присутствуют в селезенке, ЛУ перитонеальной полости. Имеют пероксидазную активность в лизосомах.

Являются Iа + -клетками, т.е. АПК. /81-12-53-135/ б) оседлые (кпд >>>: если лейкоциты прикрепляются к волокнистым структурам, то фагоцитоз идет намного эффективнее). Оседлые сосредоточены в синусоидах печени и некоторых других органов, в тканях, серозных полостях, в легких. Имеют С3-рецепторы.

Содержат пероксидазу в ЭПС. Не способны представлять антиген лимфоцитам. /81-12-53-135/ _3 типа гранул .: 1. МПХ, лизоцим, катионные белки.

Содержимое гранул первой группы стимулирует 'окислительный взрыв'. /1365к/94/ 2. Лактоферрин, лизоцим. (Лактоферрин и катионые белки в макрофагах не обнаружены; в них меньше МПХ). /307/ Второй тип гранул включает ферменты типа катионных белков, протеаз, лактоферрина и фосфолипады А2. /1365к/94/ 3. кислые гидролазы.

Макрофаги имеют 2 типа гранул: специфические (цитохромы, пероксидаза, гиалуронидаза, нейтральные протеазы, активатор плазминогена, эластаза, коллагеназа) и азурофильные. При дефиците специфических гранул нейтрофилов воспалительная реактивность снижается, развиваются тяжелые рецидивирующие бактериальные инфекции. /7073/ Бета-2-микроглобулин в нейтрофилах (65% находится в специфических гранулах, 20% - в секреторных везикулах). /2361к/94/ Дефензины - пептиды, богатые аргинином и цистеином с М. около 4 кД. Обладают широким спектром активности, в т.ч. модулируют взаимодействие нейроэндокринной и иммунной систем.

Оказывают стресс-протективное действие. /2287к/ Показателем защитной функции ПМЛ является уровень щелочной фосфатазы (при воспалительных процессах он возрастает). /7073/ ФУНКЦИИ ФАГОЦИТОВ 1. фагоцитарная (удаление из организма отмирающих или мертвых клеток; их фрагментов; агрегатов белков; частичек пыли и пр.), 2. синтетическая (фагоциты синтезируют компоненты комплемента, интерлейкины, интерферон и др. БАВ), 3. антигенпрезентирующая (макрофаги/моноциты). 4. участие в воспалительных реакциях.

Биохимический аспект Факторы, участвующие в деструкции фагоцитированного материала Кислород-зависимый механизм Кислород-независимый механизм МПХ (миелопероксидаза) Лизоцим О 2 - (супероксид анион) Лактоферрин 0Н - (гидроксильный радикал) Катионные белки 1 0 2 (синглетный кислород) Нейтральные протеазы Н 2 О 2 (перекись водорода) Кислые протеазы Дефензины /2287к/ NO оксид азота /?/ Кислая фосфатаза, липаза, эластаза, бета-глюкуронидаза и катепсины важны в переработке антигена для взаимодействия с молекулами HLA класса II. Обычно именно по ним идентифицируют лизосомы.

Макрофаги имеют обширную сеть митохондрий и шероховатой ЭПС, поэтому в основном 'работают' в аэробных условиях в борьбе с внутриклеточными микробами (спирохетами, грибами, туберкулезной палочкой). [Часто происходит организация мононуклеаров в гранулемы.] Макрофаги делятся на Ia + (мышей) - участвующие в иммунном ответе, и Ia - , фагоцитирующие через Fc-, С3в и др. рецепторы. _Регуляция фагоцитоза СТИМУЛИРУЮТ ИНГИБИРУЮТ Интерферон ТФР-бета (тромбоцитов ...) Лейкоцитарная масса ЛПС грамотрицательных микробов Аминогликозиды ( (перекрестная стимуляция ЛПС Тетрациклины /7506/ и др. продуктами микробов) Экзотоксины бактерий СРБ Некоторые эндотоксины бактерий Пептидогликаны Цитохалазин В ЕКК /2277к/ Конконавалин А Т-лимфоциты /2277к/ Гидрокортизон (подавляет хеЛимфокины сенсибилизированных мотаксис;стабилизирует мемблимфоцитов рану) ФГА Преднизолон (-'-) Тафтсин Спленэктомия Опиатные пептиды (хемотакТиазиды сические агенты) /7518/ Индометацин (аспирин не влиВещество Р яет) на образование О 2 - Аскорбиновая кислота (вит. С) /21Э118-82/ Никотиновая кислота аминофиллин Рифампицин /7506/ Pg E1 Ретиноиды (синтетические аналохолерный токсин ги витамина А) Антимакрофагальная сыворотка Секрет слюнных желез пиявок Торотраст /2399к/ рентгеновское облучение Пептиды рога сайгака (сайги) коллоидное золото (миокристин) Химически индуцированный канцерогенез Клетки могут поглощать значительную часть своей плазматической мембраны (до 50% поверхности в час.). /1559к/84/ Самым сильным, специализированным индуктором макрофагальной активации является гамма-ИФ. Он может индуцировать экспрессию более 100 различных генов в геноме макрофагов. /2461к/95/ ИЛ-4 и ИЛ-13 повышают экспрессию макрофагальных маннозных рецепторов - ММR - маркеров 'альтернативной' активации макрофагов). Up-регуляция MMR под влиянием ИЛ-4, ИЛ-13 и Pg E может быть необходима для вновь рекрутированных моноцитов/макрофагов, обеспечивающих неспецифический клиренс. /2461к/ Гамма-ИФ и ФНО-альфа, вызывающие 'классическую' активацию макрофагов, снижают количество ММР (down-регуляция) на фоне повышения бактерицидности, цитотоксичности и проявления других признаков усиленной функциональной активности клеток.

Возможно, ИФ и ФНО таким образом переключают активированные макрофаги на более эффективный фагоцитоз через FcR и СR1 или на внеклеточную микробицидность, связанную с секрецией супероксидных радикалов в микроокружение. /2461к/95/ ТФР-бета,ИЛ-2, Т-лимфоциты ИФ-гамма,ИЛ-6, ГМ-КСФ, ф -ФНО, b -ФНО В-лимфоциты - ' - /?/ альфа-ИФ,гамма-ИФ ЕКК ИЛ-1,ФНО-альфа, ГМ-КСФ ТФРb Моноциты ИЛ-1,6,8, Г-КСФ,ГМ-КСФ, ф -ФНО, ф ИФ ИЛ-1,8, Бактерии,грибки,простейшие Нейтрофилы ФАТ,ФНОф ГМ-КСФ ТФР-бета, ТФР-бета Фибробласты ИЛ-6,8,ИФ-бета Г-КСФ,ГМ-КСФ Другие ИЛ-6,ИЛ-8, клетки Эндот.клетки Г-КСФ,ГМ-КСФ Тромбоциты ИЛ-1,8 Схема цитокиновой регуляции антимикробной активности нейтрофилов. /2343к/94/ _Фенотипы - Гамма-ИФ вызывает приобретение макрофагами 'воспалительного' фенотипа. - Противоположный воспалительному фенотип - с пониженной экспрессией генов провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ФНО-альфа, МСР-1), пониженной цитотоксичностью, усиленной продукцией ИЛ-6. Такой фенотип могут вызвать катехоламины (через альфаи бета-адренергические рецепторы), вызывающие повышение уровня внутриклеточного цАМФ. /2461к/ - Под влиянием ИЛ-4, ИЛ-13, Pg E макрофаг приобретает 'асимметричный' фенотип с избирательной активацией 'scavenger' рецепторов типа ММR. /2461к/ - В затухающем очаге воспаления (в присутствии ИЛ-6) формируется иной фенотип. /2461к/ Подавление фагоцитоза может привести к инфекционным заболеваниям, паразитарным инвазиям, злокачественным новообразованиям (тумороцидный эффект макрофагов - ПОЛ), гемобластозам.

Активированные нейтрофилы выделяют ИЛ-1. /2277к/ _ Дефекты фагоцитоза Снижение фагоцитарной активности может быть обусловлено следующими дефектами. 1. Дефект подвижности (хемотаксиса) фагоцитов (синдром 'ленивых лейкоцитов') - рецидивирующие или хронические бактериальные инфекции кожи, пазух, легких, среднего уха, десен. /7514/ Дефект связывания актина.

Развивается при недоедании.

Лейкоциты в меньшей степени накапливаются в кожных окнах. /7685/82/ 2. Дефект поглощения частиц (острый лейкоз, апластическая анемия). Дефект фагоцитоза может быть после лечения стероидами. /7685/82/ 3. Дефект образования гранул и дегрануляции , причем возможен дефект образования - азурофильных гранул (первичный дефицит МПХ /см. ниже/, миеломоноцитарный лейкоз, миелобластный лейкоз, острый миелолейкоз), - специфических гранул (сочетается с нарушением хемотаксиса и противомикробной активности нейтрофилов), - а также тех и других - синдром Чедиака-Хигаши (неспособность к формированию нормальных фаголизосом; летальный исход в детском возрасте); /313/ 4. Дефект внутриклеточного метаболизма (облучение, хронический гранулематоз, ревматоидный артрит, фиброз легких). /7476/83/ Фагоциты поглощают микробы, но не убивают их. /7073/ а) _Хроническая гранулематозная болезнь . (ХГБ; нарушение продукции метаболитов кислорода) - первичное ИД-ое состояние, возникающее из-за отсутствия или дисфункции НАДФ-оксидазы в фагоцитах. В итоге не запускается кислородный взрыв, не образуется перекись водорода. Для больных характерен отрицательный NST-тест (с нитросиним тетразолием). Различают 2 варианта семейной передачи болезни: Х-сцепленный (болеют мальчики) и аутосомно-рецессивный /2225к/95/ - отсутствие цитохрома 'b' в нейтрофилах.

Приводит к незавершенности фагоцитоза. /7073/ Идентифицировано несколько мембранных и цитозольных компонентов НАДФ-оксидазы (клонировано соответственно нескольк ДНК-последовательностей). Мембранные - цитохром b558 (состоящий из пептидов gp91-фокс и р22), в цитоплазме - полипептиды р47-фокс и р67-фокс (название компонентов 'фокс' = phox от Phagocyte oxydase). В процессе активации клетки оба протеина перемещаются в мембрану, где вместе с цитохромом b558 образуют функциональную оксидазу. /2225к/95/ - От 60 до 70% всех случаев болезни - Х-сцепленный вариант (кодирующий ген в половой хромосоме), связанный с дефицитом gp91-фокс; - менее 55% всех случаев - дефект р22-фокс (кодирующий ген - в 16 хромосоме и поэтому заболевание передается аутосомно-рецессивным путем). /2225к/95/ - Дефекты р47-фокс ответственны за 20% случаев ХГБ (кодирующий ген расположен в 7 хромосоме; заболевание передается аутосомно-рецессивным путем). /2225к/95/ - Дефекты р67 ответственны за 5% ХГБ (белок кодируется в 1 хромосоме; передача аутосомно-рецессивным путем). /2225к/95/ Заболевание характеризуется: -падением продукции перекиси водорода в фагосомах, - у мальчиков отсутствует НАДи НАДФ-оксидаза, - у девочек отсутствует ГПХ (есть часть заболевших среди девочек); /7685/ Хирургическое лечение + антибиотики позволяют выжить до 20-30 лет. /7685/ При хроническом гранулематозе наиболее частое инфицирование аспергиллами. /7685/82/ Поскольку в фагоцитах микробы защищены от антибиотиков, заболевание сопровождается хроническими бактериальными инфекциями (в частности, стафилококковыми), воспалением различных органов и тканей, септическими осложнениями.

Осложнения в виде абсцессов легких, печени, брюшной полости. (Сепсиса, абсцессов мозга и менингита почти не бывает-?). /7514,7524/ Одна треть (1/3) больных погибает до 7 лет.

Поэтому заболевание называется гранулематозом детского возраста (синдром Джоба) . /313/ б) Недостаточность миелопероксидазы (МПХ). При недостаточности МПХ больные восприимчивы - к кандидам и - стафилококковой инфекции (лечение антибиотиками). /7685/82/ - клебсиеллам - кишечной палочке, - серрациям, - сальмонеллам - микобактериям, - аспергиллам - псевдомонас и др., имеющим каталазу. /2225к/ 5. Дефект опсонизации - низкий уровень комплемента или антител.

Наблюдается при миеломе, агаммаглобулинемии, поражениях печени. У таких больных отмечаются повторные респираторные инфекции, обусловленные инкапсулированными пневмококками или Haemophilus influenzae. /7514/ 6. Лейкопения . Нейтрофилия в крови развивается при первичных иммунодефицитах, синдроме Костманна, хронической идиопатической нейтропении, синдроме Швахмана, сепсисе, тимоме, наличии антител к нейтрофилам, нарушении функции Т-супрессоров, гемодиализе. /7476/ 7. Нарушения в функции или количестве лейкоцитов, вызванные лекарствами ( стероидами, антибиотиками ). _Усиленная фагоцитарная функция .. Игольчатый укол или незначительная травма без инфицирования могут привести к нагноению или гнойному артриту.

Клиническая картина у таких больных может имитировать таковую при подавленной фагоцитарной функции, однако микробиологические исследования будут отрицательными. /7514/87/ _ Фагоциты участвуют в развитии воспалительной реакции .. Нейтрофилы секретируют факторы, индуцирующие апоптоз разных клеток-мишеней ( _ апоцитоз . окружающих клеток). В свои вакуоли нейтрофилы выделяют фактор, индуцирующие апоптоз (ФИА) клеток, которые разрушают геном микрообв. Это ферменты с высокой нуклеазной активностью ( _нуклеазы .). При массивном проникновении в организм инфекционных агентов нейтрофилы активно поглощают микробы и, не заботясь об их истинном переваривании, выбрасывают в межклеточное пространство значительные количества ФИА. Цель реакции - произвести в сжатые сроки как можно более выраженное _ повреждение генетического аппарата микробов .. ФИА губительны для всех клеток: они способны осуществить деградацию НК генома любых биосистем - эукариотов, прокариотов, вирусов.

Нейтрофильные ФИА индуцируют ускорение апоптоза и у самих нейтрофилов. /2226к/97/ Фагоцитоз и апоцитоз - разные, но фиункционально сопряженные процессы.

Нейтрофилы с помощью ФИА инициируют воспалительную реакцию.

Процесс воспаления - это реакция организма на ФИА. /2226к/97/ Нейтрофилы - это клетки, у которых включена генетически заданная программа клеточной гибели. На поверхности нейтрофилов по прошествии некоторого времени появляются стркутуры, которые обусловлены апоптозом и которые узнаются макрофагами (САН - структуры апоптоза нейтрофилов). Фагоцитоз 'старых' нейтрофилов осуществляется макрофагами. /2226к/97/ - ПОВТОР Физиологический аспект Этапы фагоцитоза: 1. Хемотаксис, 2. Узнавание (адгезия - прилипание частиц к поверхности фагоцита), 3. Поглощение, 3а.Слияние фагосомы с лизосомами, 4. Переваривание. 5. Удаление 'отходов'. /307/ Первым необходимым условием для осуществления фагоцитоза является накопление макрофагов в местах присутствия антигена или продуктов тканевого распада.

Хемотаксис (приближение или аттракция; для подвижных фагоцитов) - направленное движение клетки по или против химического градиента. [Ориентация на определенные сигналы - хемотаксис; миграция - хемокинез.] Хемотаксис может быть положительным (к хемоаттрактанту) и отрицательным ('от себя'). /307/ _Хемотаксические факторы . /7519/ - С5а, С5а-dearg фрагменты комплемента (для нейтрофилов); При дефиците С5а ингибируется инфильтрация нейтрофилов в очаг воспаления.

Вирулентные стрептококки группы А синтезируют ингибитор С5а. /7508/ Пептидные ингибиторы С5а используются для подавления воспалительного ответа. /7511/ - калликреин (переводящий С5 в С5а) /7330/87/ - С3а /2291к/ - ЛТ В4; - формил-метионил-лейцил-фенилалан, - ФАТ /2291к,2369к/ - ИЛ-8 - ФНО-альфа - фактор переноса (лимфокин); - продукты распада -- соединительной ткани (пептиды коллагена); -- иммуноглобулинов (тафтсин - тетрапептид; воздействие трипсина); -- фибриногена (фибринопептид В) и другие продукты ССК; - факторы хемостаксиса (нейтрофильные, фибробластов, макрофагов - ИЛ-1,лимфоцитов; тучных клеток для эозинофилов); - опиатные пептиды. - формилпептиды St.aureus, E.coli (усиливают экспрессию CD11b/CD18 на поверхности нейтрофилов) 6 адгезия к ЭК 6 проникновение в интерстиций. /2291к/ [0-токсин Cl.perfringens подавляет хемотаксис нейтрофилов, но не макрофагов.] Хемоаттрактанты различного происхождения - усиливают движение, - в 10-20 раз повышают экспрессию рецепторов (нейтрофилов) /2369к/ -- стимулируют экспрессию молекул адгезии /2291к/ -- увеличивают экспрессию рецептора для С3в (СR1). Скорость движения макрофагов - 20 мк в минуту.

Узнавание (адгезия) : 1. Непосредственная адгезия (неопсонизирующее распознавание) проходит по следующим механизмам: а) Взаимодействие по электростатическому _заряду . (поглощение полианионов). Показано, что перитонеальные макрофаги и купферовские клетки имеют поверхностные рецепторы к анионным частицам. /7522/ б) Поглощение _гидрофобных частиц . (если объект более гидрофобен, чем макрофаги). Большинство бактерий имеют гидрофобную природу и легко захватуваются фагоцитами. /307/ Комплемент повышает гидрофобность фагоцитируемых частиц и т.о. усиливает фагоцитоз.

Фагоциты имеют множество участков связывания липида А (ЛПС Гмикробов). (11.53.304-91) в) _Интегрины и селектины . (поверхностные рецепторы). С помощью селектинов осуществляется 'качание' (rolling) фагоцитов на поверхности ЭК перед их твердым приклеплением спомощью интегринов к этой поверхности. /2291к/ Интегрины: три гетеродимера, состоящие из общей бета-цепи (CD18) и трех альфа-цепей (CD11a, CD11в, CD11с). /2291к/ Интегрин В 3 играет главную роль в узнавании апоптотических нейтрофилов. /7964/90/ На фагоцитах 2 вида селектинов: L (CD62L) и E (CD62E). /2291к/ г) Синтез _N-ацетилглюкозаминидазы . и тромбоксантина В 2 (ТХ В 2 ) для фагоцитоза эритроцитов и зимозана (грибов). /7964/ Без опсонинов поглощаются стрептококки, некоторые кишечные палочки, микобактерии. 2. Опсонин-опосредованный фагоцитоз проходит через рецепторы к опсонинам (комплемент-зависимая и др.; антителозависимая, т.е. неспецифическая и специфическая) - веществам, взаимодействие которых со своими рецепторами приводит к фагоцитозу. _Опсонины . /7523/ 1. Ig G1, Ig G3 - взаимодействие через Fc-рецепторы (антителозависимый или специфический фагоцитоз); Ig А,М,Е,D практически лишены опсонизирующей активности. 2. Фрагменты комплемента СR1 - рецептор для С3b, C4b, C5b, С5b67 /?/ CR2 - рецептор для С3d CR3 - рецептор для С3bi C1qR -рецептор для субкомпонента С1q (не встречающегося в свободном виде). Активация СR1 приводит к стимуляции фагоцитарной активности, окислительного метаболизма и высвобождению лизосомальных ферментов. /3032/ Например, через антитела или фрагменты комплемента поглощаются микробы (бактерии семейства кишечных, микоплазмы, стафилококки и др.). 3. С-РБ /7521/, - рецептор-? 4. Фибронектины (рецептор для фибронектина) 5. Фибриноген, фибрин /?/ 6. Рецепторы лектино-подобной природы - С1q и др. (маннозо-, галактозо-связывающие и др.) - поглощают объекты, включающие в свой состав соответствующие углеводные остатки. = _Лектин-зависимый фагоцитоз . /7520/ С1q (мембранный С1q). Рецепторную функцию для Fc-фрагментов иммунных комплексов на макрофагах может выполнять субкомпонент С1q, который перед выделением из клетки включается в мембрану. /3014,3017-255/ На макрофагах обнаружены лектины со специфичностью к галактозе и к N-ацетилгалактозамину; на альвеолярных макрофагах и клетках Купфера - лектины маннозного типа.

Данный лектин связывается помимо маннозы с N-ацетилглюкозамином, глюкозой и фукозой (Гбактерий, микобактерий, дрожжей). /7322/88,7513/ Такое взаимодействие обеспечивает сборку на белке комплексов С1r 2 -C1s 2 и активацию КПК, т.е. С3в-опсонизацию. Белок, связывающий маннозу, подобен С1q-субкомпоненту комплемента: М. 700 кД, состоит из повторяющихся единиц (32кД). Низкий уровень белка, связывающего маннозу, ( мкг/л) связан с повторными инфекциями в возрасте от 6 месяцев до 1,5 лет. /7513/ Имеется маннансвязывающая протеаза, способствующая самоактивации С1r и С1s и таким образом определяющая лектиновый путь активации комплемента. /7234/94/ Маннозо-связывающая сериновая протеаза проявляет С1s-подобную активность и таким образом активирует комплементарный каскад. /1995г./ 7. Рецепторы углеводной природы, взаимодействующие с лектинами чужеродных объектов (микробов и пр.). На поверхности фагоцитов имеются интегральные лектины и структурные карбогидраты (мишень для лектинов бактерий), поэтому связывание происходит двумя путями (Рис. ) Карбогидраты микроорганизмов связываются с лектинами фагоцитов. (При экспериментальном заражении животных двумя штаммами бактерий - несущих и не имеющих поверхностных лектинов, поглощались лишь бактерии, несущие лектин; бактерии, не имеющие лектина, избегали фагоцитоза и пролиферировали в организме хозяина. /7517/) Третья стадия фагоцитоза - поглощение проходит за счет сокращения актомиозиновых нитей; мембрана закрывается как застежка-молния.

Мелкие частицы захватываются при волнобразных перемещениях складок клеточной мембраны. Для поглощения более крупных частиц и клеток (эритроцитов, бактерий) типично обтекающее движение - образование псевдоподий.

Фиксированные макрофаги для фагоцитоза бактерий из кровеносного русла могут 'выдвигать' длинные цитоплазматические отростки между эндотелиальными клетками. Если объект диаметром более 10 мкм, его могут поглощать сразу несколько макрофагов: объект частично дезинтегрируется, фагоцитируется и переваривается по фрагментам. /307/ После 50%-ой утилизации мембраны при фагоцитозе с утратой большинства поверхностных маркеров восстановление ее происходит после лаг-фазы продолжительностью 4-8 часов и требует интенсивного синтеза РНК и белка (фосфолипидов,холестерина)./350/ Образование фаголизосом (слияние с азурофильными гранулами и лизосомами). В аутофагосомах содержатся компоненты самих клеток хозяина (осколки мембран, митохондрии и др.). Четвертая стадия - переваривание . Слияние с лизосомами. _Лизосомы . - гранулы с диаметром 0,25-0,5 мкм, содержащие большой набор ферментов (кислая фосфатаза, бета-глюкуронидаза, МПХ, коллагеназа, фагоцитин, лизоцим, катионные белки /лактоферрин, дефензины и пр./). /307/ В настоящее время особо важное значение придается дефензинам - богатым аргинином белкам, которые обладают способностью встраиваться в липидный слой клетки, нарушать ее проницаемость и убивать широкий спектр бактерий, грибов и даже вирусов. /2291к/ Первыми вливают свое содержимое в фагосому _специфические (или вторичные) _гранулы ., содержащие лизоцим, лактоферрин, белок, связывающих витамин В 12 и пр.

Вторыми - _азурофильные . (или первичные) гранулы, содержащие набор гидролаз, МПХ. /2291к/ Наступает _дыхательный и метаболический взрыв . (в частности, под действием ЛПС Гмикробов). Наблюдается повышенный оборот фосфолипидов и холестерина, 3-кратное увеличение поглощения кислорода и глюкозы, активности НАДФ-оксидазы, усиливается гликолиз, повышается продукция перекиси водорода, активируется гексозомонофосфатный шунт. В результате дыхательного взрыва происходит окисление сульфгидрильных групп мембранных белков до дисульфидов.

Процесс локальной полимеризации продолжается до тех пор, пока поглощаемая частица не будет полностью окружена мембраной. /7527/ Для осуществления движения гранулоциты человека нуждаются в присутствии экзогенной глюкозы, тогда как их фагоцитирующая активность зависит от способности сохранять гликоген. /7532,1831, 1601/ Основным источником АТФ фагоцитов является гликолиз, для альвеолярных макрофагов - окислительное _фосфорилирование .. /1770/ Как и в скелетной мышце, в макрофагах содержится 3-4-кратный молярный избыток креатинфосфата над АТФ. При фагоцитозе снижается содержание креатинфосфата (уровень АТФ не меняется). Биохимические изменения в метаболизме моноцитов во время поглощения: - Увеличение аэробного и анаэробного гликолиза, гликогенолиза, - Повышение потребления кислорода, - Увеличение утилизации глюкозы по гексозо-монофосфатному шунту - Повышенный оборот фосфолипидов и холестерина - Временное увеличение концентрации лизосомальных ферментов - Накопление перекиси водорода - Секреция пирогенов а _) Ферментативная деструкция (кислород-независимый процесс) .. Ведущим механизмом деструкции является синтез активных форм кислорода (супероксиданиона, синглетный килород, перекись водорода, . ОСl, . ОBr, . OJ (галогенизированные формы образуются при участии миелопероксидазы - МПХ). /2689к/ Кислороднезависимые механизмы проходят преимущественно в гнойном очаге. При снижении в лизосомах рН ( поглощения начинают работать бета-галактозидаза, бета-глюкуронидаза, коллагеназа, липаза, эстеразы, лизоцим, кислая щелочная фосфатаза, лактоферрин. В результате все большего присоединения азурофильных гранул рН снижается до 4,5 (средняя рН лизосом - 4,7 - 4,8). Расщеплением убитых микробов начинают заниматься кислые протеазы - катепсины и др. (Насчитывают более 80 кислых гидролаз.) Концентрация ферментов постепенно увеличивается.

Оптимум рН для катепсина А - 5,0, катепсина В - 4,8, катепсина С - 6,0, катепсина Д - 3,2 и 4,5, катепсина Е - 2,5. /7475/83/ б _) Деструкция радикалами (кислород-зависимый процесс); ПОЛ . Поглощение микроба фагоцитом сопровождается окислительным взрывом, в процессе которого _НАДФ-оксидаза . катализирует образование мощных антимикробных агентов путем превращения молекулярного кислорода в О 2 - . Образование других высокоактивных кислородных метаболитов - перекиси водорода и гидроксильного радикала (ОН - ) - происходит без участия ферментов, а образование гипохлоридного аниона (ОСl - ) - при участии _миелопероксидазы (МПХ). /2225к/95/ [Происходит резкая активация гексозомонофосфатного шунта 6 образование НАДФН 6 восстановление молекул кислорода на цитохроме b245. Происходит бурное потребление кислорода. В результате образуется перекись водорода, различные радикалы кислорода, МПХ запускается мощная система галогенирования, что сопровождается гибелью микроорганизмов.

Глюкоза + НАДФ 6 шунт 6 пентофосфат + НАДФН НАДФН + 0 2 6 цит.в245 6 НАДФ + + 0 2 - (надпероксидный анион) Фермент, обеспечивающий образование ключевого окислительного элемента - 0 2 - , представляет собой,по-видимому, мембраносвязанный флавопротеид, использующий в качестве физиологического агента НАДФ. В основе продукции супероксида лежит использование активной формы железа и некоторых других соединений не самого нейтрофила, а клетки-мишени. /7516/ 20 2 - + 2Н + 6 спонтанная дисмутация 6 Н 2 0 2 + 1 0 2 (синглетный кислород) Н 2 0 2 + 0 2 - 6 1 0 2 + ОН - + ОН . (свободный гидроксил) Н 2 0 2 + Сl - 6 МПХ 6 ОСl - + Н 2 0 6 О 2 + Сl - + Н 2 0 20 2 - + 2Н + 6 0 2 + Н 2 0 2 (фермент - надпероксиддисмутаза) Н 2 0 2 6 каталаза 6 2Н 2 0 + 0 2 ] Сами фагоциты защищаются от радикальных форм ферментами - антиокислительной системой (СОД, каталазой, наличием глутатион-восстановительной системы). Содержание пероксидазы снижено при ревматизме, туберкулезе, инфаркте миокарда, опухолевых заболеваниях. /7515/ Ацетилсалициловая кислота (60 мкг/мл) не влияет на потребление кислорода и образование супероксида; индометацин ингибирует потребление кислорода и образование супероксида. /21Э118-82/ Окислительные и другие метаболиты фагоцита по системе микротрубочек поступают внутрь фаголизосомы и обеспечивают бактерицидный и тумороцидный эффект макрофагов. В результате потребления ионов водорода (особенно в условиях гнойного очага воспаления, не снабжающегося кислородом) повышается рН и создаются оптимальные условия для работы катионных белков (катепсина G) и лизоцима.

Катионные белки усиливают генерацию супероксида. /7477/88/ Деструктированные объекты окончательно перевариваются гликолитическими, протеолитическими, липолитическими и прочими ферментами фагоцитов.

Мономерные субъединицы (аминокислоты, моносахара, глицерин, жирные кислоты, нуклеотиды) включаются в общий метаболический процесс организма, чужеродные углеводные и др. субстанции выбрасываются в кровоток и выделяются с мочой, а непереваренные антигенные детерминанты встраиваются в процессе экзоцитоза в наружную мембрану, образуют комплекс с антигенами HLA II класса и запускают иммунный ответ.

Некоторые авторы считают, что фагоцитоз и функцию антигенпредставляющих клеток (АПК) осуществляют разные субпопуляции клеток.

Образуется оксид азота (NO). /2319к/97/ Активизированные нейтрофилы (супернатант) обладают цитотоксическими свойствами в отношении опухолевых и ВПК. Эффект не связан с активными формами кислорода, дегрануляцией, метаболитами АК. /2319к/97/ 3 исхода фагоцитоза : гибель микроба, гибель фагоцита, симбиоз.

Различают завершенный и незавершенный фагоцитоз. При незавершенном фагоцитозе микробы поглощаются, но не погибают и не преревариваются, а иногда размножаются (покидают фагосому и циркулируют в цитоплазме). В случае завершенного фагоцитоза в дальнейшем происходит экзоцитоз (выброс продуктов деградации) или регургитация (выброс неполностью закрытой фагосомы- ?). Механизмом экзоцитоза выбрасываютс из клетки белки, синтезирующиеся на рибосомах ЭПС. Они переходят в цистерны эпс, затем аппарат Гольджи, направляются к поверхности клетки, сливаются с мембраной клетки и содержимое выходит из клетки.

Микробы, которые поглощаются /350/84/ без опсонизации через комплементарные через комплементарные или Fc-рецепторы и Fc-рецепторы шероховатые формы микоплазмы Е.с. капсулированная пневмококков стафилококки с (с капсульным АГ) стрептококки белком А сальмонеллы с Vi-АГ (без гиалурон.к-ты и М-белка) нек.штаммы Е.с., стафилококков, микобактерий, гонококки Эволюционно сформированные механизмы защиты микробов от фагоцитоза : 1) Капсулы пневмококков, сибиреязвенных бацилл, клебсиелл, СГ и др. микробов. К-антигены кишечной палочки, сальмонелл (капсульные АГ). Полисахариды менингококков, возбудителей чумы, микоплазм. Если микробы декапсулировать, то они фагоцитируются. 2) Белок А стафилококка, белок М стрептококков, представляющие функционально белки, подобные Fc-рецепторам (сцепление с антителами происходит не антиген-связывающей областью /Fab-фрагментом/, а эффекторным звеном /Fc-фрагментом/, поэтому антитела неспецифически поглощаются, но не могут выполнить Fc-зависимых функций - проактивировать фагоцитоз или систему комплемента). 3) ЛПС энтеробактерий, воскоподобный слой микобактерий, гиалуроновая кислота стрептококков, бледной трепонемы. 4) Изменение метаболизма фагоцитов - Пероксидаза, каталаза многих микробов (антиоксиданты блокируют ПОЛ в фаголизосомах). При ряде ООИ. - Блокада слияния фагосомы и лизосомами (у ряда микробов). - Индукция тормозных медиаторов - ТФР-бета, ИЛ-10 макрофагами (Lrishmania spp., Trypanosoma cruzi, Mycobacterium avium) /2461к/95/ 6 подавление окислительного и пр. метаболизма, внутриклеточная персистенция. - Дифтерийный токсин и пр. (холерный токсин активирует = адъювант) 6 изменение метаболизма фагоцитов. - Изменение процессов фосфорилирования клеточных белков, активности протеинкиназы С, Са 2+ -зависимого пути передачи сигналов. 5) Пили гонококков препятствуют поглощению микроба.

Зачастую фагоцитоз опсонизированных антителами микробов завершенный, неопсонизированных - незавершенный. . см. материал по практическим занятиям Практические занятия - Определение абсолютного и относительного числа нейтрофилов и моноцитов - Определение фагоцитарной активности нейтрофилов. ОЦЕНКА ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ Фагоцитозом называется поглощение клетками микробов или чужеродных частиц.

Снижение числа нейтрофилов ниже 25% от нормы опасно для жизни. /2269к/ после комплементарного лизиса АПК, КПК АТ Фагоцитоз после 'работы' антител (ИК) уровень АТ комплексов с фибронектином, альфа-2-макроглобулином, С-РБ, лектинами и пр. Для изучения поглощения используют бактериальные клетки (St.aureus или E.coli), дрожжи, латексные частицы. Более интенсивно фагоциты поглощают чистицы, обработанные сывороткой, содержащей опсонины (Ig G, комплемента, фибронектин, СРБ и др.). /2291к/ При определении фагоцитарной активности определяют следующие показатели: - фагоцитарный показатель - процент фагоцитирующих нейтрофилов к общему количеству нейтрофилов; - фагоцитарный индекс - среднее число микробных тел, захваченных каждой клеткой; - опсонический индекс - переваривающая способность - постепенное уменьшение ( в течение 50-60 минут) интенсивности окрашивания фагоцитированных микробов вплоть до их полного обесцвечивания; - завершенность фагоцитоза - отношение лейкоцитов с завершенным фагоцитозом к общему числу лейкоцитов с фагоцитированными микробами, выраженное в процентах. /272-53/ _ Методики . : Фагоцитарную активность можно определять в условиях in vitro и в условиях in vivo. I. In vitro. - Методы оценки экспрессии С3- и Fс-рецепторов по тесту РОК; - Радиометрические методы изучения стадии захвата. - Тест восстановления нитросинего тетразолия. По реакции восстановления нитросинего тетразолия судят об стимуляции гексозомонофосфатного шунта. /1583-4/ II. In vivo. Белым мышам вводят в/бр. 2мл стерильного МПБ, чем вызываютлокальный лейкоцитоз. Через 4 часа в/бр. вводят 1мл 2млрд-ой культуры Staphylococcus albus. Через 10-15 минут из перитонеальной жидкости готовят мазки (можно из осадка после центрифугирования), окрашивают метиленовым синим.

Незавершенный фагоцитоз (наблюдается при поглощении туберкулезных палочек, возбудителей лепры, лейшманиоза, гонореи, менингококков, вирусов, риккетсий) : Рис. 'Незавершенный фагоцитоз гонококков (мазок in vivo)' Показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ) - процентное отношение умерщвленных и всех поглощенных микробов (примерно равно 0,80). Выделяют 5 степеней завершенности фагоцитоза (ЗФ): - высокая ЗФ (1,0-0,82); - средняя (0,81-0,45); - слабая (0,44-0,32); - очень слабая (0,31-0,29) - ЗФ отсутствует (0,28-0,25) Фагоцитарная активность (фагоцитоз стафилококка) Реакцию осуществляли по методу Н.В.Васильева и соавт. (1972). Для постановки реакции в лунки иммунологического планшета вносили по 15 мкл гепарина в концентрации 10 ед/мл, 50 мкл цельной крови, взятой с пальца натощак, и добавляли 25 мкл 2 х 10 9 микробных тел/мл суточной агаровой культуры Staphylococcus aureus разведенных на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,2. В опытные лунки вводили по 10 мкл расстворов изучаемых полипептидов, в контрольные - 10 мкл фосфатного буфера.

Лейкоцитарно-микробную взвесь перемешивали и инкубировали при температуре 37С в течение 30 минут, повторно встряхивая каждые 5 минут. После инкубации взвесь ресуспендировали, готовили мазки, фиксировали 10 минут метанолом и окрашивали по Романовскому-Гимза.

Готовые препараты микроскопировали с использованием масляной иммерсии и вели подсчет в 200 нейтрофилах.

Поглотительную способность фагоцитов оценивали по следующим показателям: 1) фагоцитарный показатель - процент фагоцитировавших клеток из числа сосчитанных нейтрофилов; 2) фагоцитарный индекс - среднее число микробов, поглощенных одним активным нейтрофилом. Для оценки переваривающей функции нейтрофилов определяли показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ) по формуле: общее количество переваренных микробов ПЗФ = х 100 %. общее количество поглощенных микробов Чувствительным методом оценки функциональной активности фагоцитов является метод определения хемилюминесценции крови. /7062/ - Приготовить кровяно-микробную взвесь (0,05мл 2% цитрата натрия, 0,1мл крови и 0,05мл 2 млрд-ой взвеси микробов - микрококков); - для определения опсонического индекса в опытную пробу дополнительно добавляетя антисыворотка к микробам или сыворотка больного для определения функциональной активности антител к микробам; - выдержать в термостате 30 мин. при 37 0 С. - приготовить мазок из кровяно-микробной взвеси; - высушить мазок, окрасить по методу Филлипсон: краситель Романовского развести этиловым спиртом 1:3. На высушенный препарат наносят 5 капель красителя и выдерживают 5 минут (одновременная фиксация и окраска). Не сливая краску, добавляют водопроводную воду, 5 капель на 5 минут.

Промывают водой, высушивают, микроскопируют с иммерсией. - В мазке определяют а) фагоцитарный показатель - процент фагоцитирующих лейкоцитов (среди полиморфоядерных лейкоцитов). Подсчитывают 100 гранулоцитов и, например, если 35 из них водержат микробы, то фагоцитарный индекс равен 35%. б) фагоцитарное число или индекс (количество микроорганизмов, поглощенных одним нейтрофилом); считают суммарное количество микроорганизмов, например, 567 во всех фагоцитирующих гранулоцитах /80/ и делят на число фагоцитов.

Частное от деления (567:80=7) отражает сруднюю поглотительную способность одного фагоцита. в) определяют опсоно-фагоцитарный индекс (ОФИ). Для этого либо рассчитывают частное от деления ФЧ (фагоцитарного числа) больного на ФЧ здорового донора (при этом ОФИ должен быть больше единицы; либо ОФИ определяют эмпирическим методом, с помощью которого анализируют состояние 25 нейтрофилов по следующей схеме: Количество микроОценка фагоцитоза Количество нейтОФИ бов, фагоцитиророфилов с данной ванный одним степенью фагоцигранулоцитом тарной активности 0 0 2 0х2=0 от 1 до 20 + (один) 5 1х5=5 от 20 до 40 ++ (два) 10 2х10=20 от 40 и более +++ (три) 8 3х8+24 Итого: ОФИ=49 Максимальное значение ОФИ - 75, т.е. во всех 25 нейтрофилах фагоцитировано от 40 и более микробов. У здоровых людей ОФИ равен 10. ОФИ от 10 до 24 - слабо положительный (+); от 25 до 49 - ясно выраженная реакция (++); от 50 до 75 - резко положительная реакция (+++). Полученые результаты внести в протокол.

Фагоцитарный показатель у здорового человека - 70-84%. Фагоцитарное число у здорового человека - 4-?. Фагоцитарное число после обработки микробов антителами (иммунной сывороткой) или комплементом - Опсонический индекс - больше 1. Фагоцитоз культуры стафилококка или микрококков в отсутствие антител идет плохо, при наличии антител в сыворотке или плазме фагоцитоз ускоряется, при добавлении комплемента или активации комплемента в крови исследуемого фагоцитоз резко ускоряется, т.к. происходит как через Fc-, так и через С3в-рецепторы.

Оценка степени перекисного и радикального окисления по НСТ-тесту (NBT-тест) Тест восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) Тест бессубстратного восстановления нитросинего тетразолия основан на способности фагоцитов утилизировать кислород с образованием высокореактогенных свободных радикалов. НСТ является индикатором респираторного взрыва.

Сущность метода заключается в образовании нерастворимых окрашенных зерен формазана при восстановлении НСТ супероксидным радикалом. Метод высокоинформативен - для оценки функциональной активности фагоцитов, - прогнозирования тяжести заоблевания, - контроля за эффективностью антибактериального лечения, - дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных заболеваний и пр. /2291к/ - Получены доказательства высокого уровня корреляции между образованием активных форм кислорода и киллингом. Метод Н.Е.Виксмана, А.Н.Маянского (1979). Изучаемые образцы веществ в количестве 20 мкл вносили в лунки иммунологического планшета, в контрольные лунки - 20 мкл среды 199. В каждую из лунок вносили по 20 мкл цельной крови, взятой из пальца здоровых людей пипеткой, предварительно промытой раствором гепарина 250 ед/мл и добавляли 20 мкл 0,15% суспензии нитросинего тетразолия (Reanal, Венгрия) на 0,1 М фосфатном буферном растворе, рН 7,2. Содержимое лунок осторожно перемешивали и инкубировали при температуре 37 о С в течение 30 минут, встряхивая планшеты каждые 10 минут. После инкубации содержимое перемешивали, готовили мазки и высушивали на воздухе.

Готовые мазки фиксировали метанолом 10 минут, высушивали и докрашивали 0,5% раствором сафранина. В качестве активаторов фагоцитов рекомендуется использовать опсонизированный зимозан или акктиватор протеинкиназы С - форболмиристат ацетат. /2291к/ Об интенсивности радикалообразования судят по количеству диформазана, который откладывается в виде грубодисперсных темносиних гранул внутри или на поверхности активированного нейтрофила. /7062/ При микроскопии в каждом мазке подсчитывали 100 нейтрофилов, среди которых определяли процент клеток, содержащих отложения диформазановых гранул (НСТ-позитивные нейтрофилы). Далее расчитывали индекс активации нейтрофилов (ИАН) по формуле: А х 0 + Б х 1 + В х 2 + Г х 3 ИАН = , 100 где: А - количество клеток, не содержащих диформазановых отложений; Б - количество клеток, в которых площадь отложений диформазана не превышает 1/3 площади ядра; В - количество клеток, в которых названные отложения занимают от 1/3 до всей величины ядра; Г - количество клеток с диформазановыми отложениями по площади превосходит площадь ядра. НСТ-тест может быть сделан без дополнительной стимуляции (спонтанный НСТ-тест) или после стимуляции нейтрофилов in vitro (индуцированный НСТ-тест). /7062/ При патологии чаще ПОЛ растет.

Поэтому если лечение выбрано правильно, то процент активированных нейтрофилов быстро падает, опережая динамику лейкоцитарных сдвигов, СОЭ и др. /7062/ Сниженные показатели НСТ-теста 6 неблагоприятный исход (сепсиса) Повышенные показатели НСТ-теста 6 опасность развития гнойных осложнений после операции.

Нормальные показатели НСТ-теста 6 успешная терапия. /1365к/ [Преципитат с НСТ может образовывать гепарин. /1575к/90/] На стекла с прилипшими клетками капают 5 капель (0,14 мл) 1,03% раствора нитросинего тетразолия (17мг на 14 мл). Лизосомально-катионный тест (ЛКТ) Растворами исследуемых полипептидов по 50 мкл заполняли лунки иммунологического планшета, в которые вносили по 20 мкл цельной крови здоровых доноров, взятой со скарифицированной ранки пальца руки при помощи пипетки, предварительно промытой раствором гепарина 250 ед/мл.

Полученную взвесь клеток крови инкубировали 1 час при температуре 37С. После инкубации готовили мазки, сушили на воздухе при комнатной температуре и окрашивали по методу В.Е.Пигаревского и соавт. (1981) в 0,1 % забуференном спиртовом растворе зеленого прочного с рН 8,2 в течение 20 минут.

Дополнительную окраску мазков проводили 0,25% водным раствором азура А. Окрашенные препараты промывали дистиллированной водой, высушивали на воздухе и микроскопировали с использованием масляной иммерсии. При исследовании просматривали 100 гранулоцитов.